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目的：构建携带白细胞介素24（Interleukin-24,IL-24）基因和抑瘤素M（OSM）基因的双基因共表达腺病毒载体（Ad-IL-24-OSM）并开展对A375人黑色素瘤细胞体内外抗肿瘤效应的实验研究。方法：在本科室已成功构建pTrack-CMV-poly-A-promoter转移质粒的基础上，在多克隆酶切位点的Bgl II、Sal I之间和Not I、Xho I之间分别插入IL-24和OSM基因片段，构建pAdTrack-CMV-IL-24-polyA-promoter-OSM重组转移载体，经同源重组、包装和扩增获得Ad-IL-24-OSM双基因共表达重组腺病毒子，体外检测Ad-IL-24-OSM重组腺病毒子的效价，感染A375黑色素瘤细胞后，RT-PCR、westernblot法检测IL-24、OSM在A375人黑色素瘤细胞中的转录和表达；荧光显微镜观察感染后的A375细胞的形态学改变； MTT法检测Ad-IL-24-OSM对A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用；流式细胞术(FCM)检测重组病毒子对A375黑色素瘤细胞的周期生长抑制和促凋亡效应；半定量RT-PCR法检测A375黑色素瘤细胞中的p21、p53、Bax、Bcl-2mRNA的表达水平。western blot检测Caspase-3凋亡相关蛋白的表达；通过建立A375人黑色素瘤细胞移植瘤瘤动物模型,用Ad-IL-24-OSM重组病毒子进行实验干预，检测瘤体重量，HE染色法检测瘤块组织切片中的细胞核形态的变化；免疫组化检测移植瘤块切片中P21、P53、bax、bcl-2、CD34、COX2、Caspase-3的表达情况。结果：1. PCR和双酶切分析结果显示成功构建了Ad-IL-24-OSM双基因共表达腺病毒载体。2. RT-PCR和Western blot检测证实腺病毒介导的IL-24和OSM双基因均可在A375人黑色素瘤细胞中稳定转录及表达。3. Ad-IL-24-OSM双基因共表达腺病毒载体能显著抑制A375细胞的生长和诱导细胞凋亡，并显著优于Ad-IL-24、Ad-OSM单基因组（P<0.05）。4.体内实验表明Ad-IL-24-OSM腺病毒载体可以显著抑制裸鼠人黑色素瘤移植瘤的生长，且均具有抑瘤增效的相加作用（Q=1.02）。5.细胞凋亡分子机制检测发现：Ad-IL-24-OSM能明显上调A375人黑色素瘤细胞P21、P53、Bax、Caspase-3和下调Cox-2、Bcl-2、CD34等细胞周期和凋亡相关蛋白的表达;且其效应均较Ad-IL-24、Ad-OSM更为显著。结论：Ad-IL-24-OSM双基因腺病毒共表达载体构建成功，在体内外均可明显抑制A375细胞的生长，诱导其凋亡，其机制可能是与上调p21、p53、bax和下调Cox-2、Bcl-2、CD34的基因表达水平，并通过激活Caspase-3凋亡途径诱导A375细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。