快速检测副溶血性弧菌光电化学免疫传感器的构建及研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snowbar
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随着科技的进步,生活水平的提高,人们对健康问题也越来越重视。食源性疾病目前已成为对世界公共卫生威胁最大的问题之一。其中副溶血性弧菌所引起的食物中毒事件近年来有增无减,从发现初期只限于沿海地区,到目前已广泛波及至各个地区。由其引发的食物中毒症状危害巨大,而目前的检测方法大都局限于检测时间长、检测过程繁琐复杂、检测成本高以及检测仪器无法满足临场检测等。因此有必要研究出一种对检测副溶血性弧菌具有宽的检测范围、低的检出限和低成本的快速检测方法。本课题研究了一种CdSe量子点敏化稀土掺杂TiO2作为光敏材料,利用副溶血性弧菌与其抗体能够特异性结合的原理,使用所制备的免疫传感器对副溶血性弧菌进行检测。采用水热法成功制备了Ho3+/Yb3+-TiO2样品,与未经稀土元素掺杂的TiO2样品进行比较发现,经过掺杂的样品具有比未掺杂样品更小的粒子尺寸,并且具有更高的光电流响应性,其中Ho3+/Yb3+的比例为1:5时光电流最大。同时对该比例下的样品浓度进行了优化,在浓度为2 mg/m L时光电流可达40μA,是纯TiO2样品光电流的一倍。同时比较研究了不同Cd:Se比例所制备的CdSe量子点的光电流稳定性以及光电流性能,Cd:Se为1:0.3时,所产生的光电流最稳定,同时保存时间最长。采用TGA-CdSe量子点敏化的TiO2作为光敏材料,利用层层自组装的方法构建成的光电化学传感器对副溶血性弧菌的检测范围为10~2-10~7CFU/m L,检出限为50 CFU/m L。而利用TGA-CdSe对Ho3+/Yb3+-TiO2进行敏化,构建成的光电化学传感器的检测范围为10~2-10~9CFU/m L,检出限为25 CFU/m L,同时该方法构建的传感器具有良好的特异性、稳定性和重现性。结果表明,通过提高光敏材料的光电活性,可以提高传感器的检测性能。另外本文研究了荧光定量PCR检测副溶血性弧菌的方法,以DNA试剂盒方法进行DNA提取,以tdh基因为目的检测基因,研究结果表明该方法在50-5×10~8CFU/m L具有良好的线性关系,R~2=0.993,扩增效率为101%。之后比较研究了两种快速检测方法对于人工模拟水产品的检测效果,光电化学免疫传感器RSD普遍偏大,RSD范围为6.7-20.3%,但其平均值均优于RT-PCR方法。
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