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本实验室从中华芦荟中分离到一株植物内生菌A11,该菌株能产抗金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的次级代谢产物,对多种植物病源真菌也具有不同程度的抗性,抗菌谱较广。但尚未得到纯品,并且对其理化性质也知之甚少,为了确定该活性成分的分子结构,本实验以金黄色葡萄球菌为指示菌,通过两种不同的分离纯化路线对活性物质进行富集,得到了一定纯度的活性物质,初步了解了一些分子结构信息。研究方法一,植物内生菌A11接种于PDA培养基中,经摇床发酵48个小时得初始发酵液,发酵液通过超声波破碎,105℃灭菌,10000r/min离心5分钟,保留上清液,上清液通过透析(分子量截留为3500),取透析液,透析液通过低温真空浓缩至一定体积,与正丁醇1:1等体积萃取,有机相低温真空浓缩至干,用少量的甲醇溶解得粗样品。通过硅胶柱梯度洗脱对活性物质进行分离纯化,气质联谱对收集的活性成分进行分析。结果如下:经硅胶柱层析分离,甲醇:乙酸乙酯在4:6,5:5两个洗脱梯度分别洗脱出A、B两种活性成分。通过气质联谱分析,A、B两种活性成分的质谱图都含有两种相同成分,分子量分别为:475.2、499.5。使用硅胶分离没能使活性成分分开。研究方法二,植物内生菌A11接种于PDA培养基中,经摇床发酵48个小时得初始发酵液,发酵液通过用6M/L盐酸调PH至3左右,静置一段时间后,10000r/min离心5分钟除去杂蛋白,NaOH调节发酵上清液的PH为7,然后用3倍体积的无水乙醇再次除去发酵上清液中的杂蛋白和多糖,然后抽滤,抽滤液经过低温真空减压浓缩干燥后用少量甲醇溶解得粗样品,然后经硅胶柱层析分离,浓缩结晶,葡聚糖凝胶LH-20按分子量大小分离。通过液质联谱和核磁共振对活性物质的分子量和分子结构进行初步鉴定。结果如下:经硅胶柱层析分离,甲醇:乙酸乙酯梯度洗脱,在2:8,3:7两个洗脱梯度分别洗脱出A-1号、A-2号两种活性成分。A-1号经硅胶柱再次分离,合并活性高的洗脱液,经过浓缩以及静置析出了结晶。A-2号通过连续两次的硅胶柱层析分离,葡聚糖凝胶LH-20按分子量大小分离,合并活性高的洗脱液,经过浓缩以及静置,最后也得到了一定纯度的活性物质。A-1号、A-2号两种活性物质分别通过液质联谱分析得到其分子量分别为:460.17、460.2。A-2号活性物质通过核磁共振氢谱分析,推测其为不含有苯环和醛基,可能含有酰胺键、烷基、碳碳双键等化学基团的化合物。