黄曲霉毒素M₁是黄曲霉毒素B₁在动物体内氧化酶作用下经羟基化而形成的,该毒素具有强烈的致癌性、致畸性以及致突变性,此毒素痕量存在于乳制品中,由于黄曲霉毒素M₁耐高温能力强,因此在乳制品的加工过程中无法通过高温杀菌工艺直接除去,所以世界各国大多采用高灵敏度的检测方法来监控乳及乳制品中黄曲霉毒素M₁的污染程度,但是目前国内还没有发现可以完全代替国外先进的快速检测黄曲霉毒素M₁的相关产品,主要原因是国内在分泌抗黄曲霉毒素M₁抗体杂交瘤细胞株的筛选及相关技术领域方面存在一些瓶颈问题尚未解决。本研究利用购自Sigma公司的黄曲霉毒素M₁与牛血清白蛋白的结合物为免疫抗原,共免疫3只6周齢 Balb/C小鼠,经3次免疫后效价可达1:32 000以上,取效价最高的三号小鼠经融合、高通量筛选后,利用单细胞显微操作技术将单个细胞集落分离出来,最终获得21株杂交瘤细胞株系,取其中亲和力最强的33-B-04进行了生物学活性实验,并经亚型试剂盒鉴定得出该株杂交瘤细胞分泌抗体的重链为IgG2b型,该株杂交瘤的细胞分泌的抗体轻链为λ链,分别采用小鼠腹水制备法和无血清培养法大量生产抗体,然后通过蛋白G陶瓷珠对无血清细胞培养的上清液进行抗体纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定目标抗体纯度达到95%以上,纯化后的抗体蛋白浓度为5.14mg/mL时抗体的效价为5000×29,得到的抗黄曲霉毒素M₁单抗亲合力为5.5×10¹（0）M^-1,连续培养50代后测得抗体效价仍保持稳定。利用高通量筛选方法可以制备出具有高亲和力的抗黄曲霉毒素M₁单克隆抗体,可为检测黄曲霉毒素M₁免疫体系的建立提供良好的抗体材料。本课题利用制备出的亲和力最强的抗体建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法,确立的最佳反应条件为:以0.02μg/mL AFM₁-BSA于4℃包被12h;利用5%的脱脂乳粉于37℃封闭2h;以1:60 000稀释IgG-HRP置于37℃孵育1h;利用TMB于37℃避光显色15min;竞争模式采取板内竞争。最终建立的间接竞争检测黄曲霉毒素M₁方法的最低检出限为0.01ng/mL,最佳检测范围为0.1¹0ng/mL,准确度范围为100%～118%,该法与AFM₁结构类似的AFB₁、AFG1交叉反应率分别是21.5%、16.6%,与其他结构类似物交叉反应性低于5%。本研究建立的间接竞争检测方法均一度、精密度、稳定性均良好,具有很大的应用前景。