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目的：拟通过基因转导的技术(磷酸钙DNA共沉淀法和vigofect真核细胞转染试剂)，建立包装重组AAV的技术平台，并在此基础上构建携带人β淀粉样肽单链抗体的基因scFv的重组腺相关病毒，为阿尔茨海默病的治疗提供新的实验手段。试验的理论基础主要来自两大AAV包装技术原理：rAAV-Helper free system和rHSV-RC感染包装细胞系统。
第一部分：外源基因转染真核细胞的方法的摸索。
方法：携带报告基因绿色荧光蛋白的质粒pSNAV2.0-EGFP作为外源基因，比较磷酸钙共沉淀法和vigofect阳离子非脂质体高效真核转染试剂在：HEK293T细胞和Hela细胞、LA795细胞的瞬时表达，以寻找一种经济高效的转染方法。
结果：磷酸钙共沉淀法和vigofect同步转染293T细胞后，2天后荧光显微镜下计数表达绿色荧光蛋白的细胞数量，计算转染效率4μg质粒磷酸钙法效率为49％，vigofect法效率为61％；磷酸钙共沉淀法和vigofect同步转染Hela细胞后，计算转染效率磷酸钙法为17％，vigofect法为42％；磷酸钙共沉淀法和vigofect同步转染LA795细胞后，转染效率磷酸钙法为3％，vigofect法为13％。
结论：HEK293T细胞的转染效率是最高的，磷酸钙法可达到约50％，威格拉斯试剂更高些，而LA795细胞转染效率最低。
第二部分：pSNAV2.0-EGFP转染小鼠肺癌LA795稳定细胞系的建立。经磷酸钙共沉淀法将pSNAV2.0-EGFP转入LA795细胞，2天后加入600μg/μl的G418抗生素筛选，抑制没有转入或者没有稳定转入外源基因的细胞生长，经过2周的筛选后，仅剩下稳定转染表达EGFP的细胞，通过有限稀释法，将这些细胞尽量以单细胞分入96孔板继续培养，并加入300μg/μl的G418维持浓度。当细胞分裂增长呈克隆后，再转入48孔板继续培养，继而转入24孔板，6孔板，最后得到稳定转染pSNAV2.0-EGFP的小鼠肺癌LA795细胞系；
结论：经过磷酸钙共沉淀法联合G418抗生素的筛选，可以得到稳定表达外源基因的细胞系，该株细胞可作为包装细胞系，用于重组腺相关病毒的包装。
第三部分： AAV2.0-EGFP和.AAV2.0-VEGF-IRES-EGFP的包装和纯化。以rAAV-Helper free system为生产平台，以Stregene公司的pHelper和pAAV-RC为辅助质粒，联合pSNAV2.0-EGFP，采用磷酸钙法三质粒共转染的技术将三个质粒转入HEK293T细胞中，3天后搜集纯化病毒，测定病毒生物滴度。结论：以Stregene公司的pHelper和pAAV-RC为辅助质粒，加上本元正阳公司的载体质粒pSNAV2.0-EGFP，利用三质粒共转的方法可以成功包装出有生物活性的重组腺相关病毒颗粒，经过初步纯化后可用于细胞试验。
第四部分：AAV2.0-Aβ-scFv的包装和纯化。pHelper、pAAV-RC、pSN?AV2.0-A β-scFv共同转染HEK293T细胞中，三天后搜集病毒，并初步纯化，将搜集到的病毒转染Hela细胞，Western法测定单链抗体的表达。结论：应用pHelper、pAAV-RC、pSN．AV2．0-scFv三者共同转染293T细胞，可以包装出携带针对阿尔茨海默病的β淀粉样肽的单链抗体基因的重组腺相关病毒，该病毒可能成为治疗阿尔茨海默病的基因药物。