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目的:因外伤、肿瘤或牙周炎引起的骨缺损是临床上最常见的口腔疾病之一,因此,对骨缺损部位进行骨组织再生修复显得尤为重要。自体骨移植,引导骨再生等都是现阶段临床上常用的骨增量方法,在这些方法中都会需要使用骨移植生物材料。而骨再生材料植入体内后,首先会引发以M1巨噬细胞为主体的免疫炎症反应,继而形成巨噬细胞和骨髓间充质细胞之间相互调控的联级放大反应,最终形成局部免疫微环境。研究证明,生物材料可调控骨髓间充质细胞对巨噬细胞极化作用。而骨膜细胞也是参与骨再生的重要间充质干细胞群,但在骨替代材料的作用下,骨膜细胞对巨噬细胞主导的炎症反应的调节作用尚不清晰。本研究旨在探讨临床上广泛使用的脱蛋白牛骨基质(DBBM,Bio-Oss)是否可以影响骨膜细胞调控M1型巨噬细胞,从而对初始免疫反应进行调节。方法:取6周雌性昆明小鼠颅骨顶部的骨膜细胞,流式细胞术检测CD90、CD29、CD45、CD34的表达情况;成脂、成骨、成软骨诱导分化,检测其多向分化潜能。使用从低到高浓度(0,1,5,10和20 ng/m L)的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)分别处理小鼠骨膜细胞24h,根据CCK-8和q RT-PCR结果建立体外炎性激活骨膜细胞(Inflammatory priming PDCs)实验模型。将LPS刺激后的骨膜细胞分为两组,未处理组使用DMEM培养基培养,实验组使用DBBM浸提液培养。24h后均换成DMEM培养基继续培养24h,取上清。将未处理组的上清记为A液,实验组则记为B液。根据q RT-PCR结果证明LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7为M1型巨噬细胞之后,分别加入前述的条件培养液培养24h。将加入A液的记为对照组(Control),加入B液的记为实验组(DBBM)。通过CCK-8检测M1型巨噬细胞增殖能力;Transwell检测其迁移能力;利用q RT-PCR、免疫荧光、ELISA检测M1型巨噬细胞相关基因(IL-1β、i NOS、TNF-α)在基因水平、蛋白水平和分泌水平的表达量。结果:小鼠原代骨膜细胞表面间充质表面标记CD90,CD29阳性率均为99%以上,造血干细胞表面标记CD34,CD45均为阴性。成骨、成脂以及成软骨分化的染色结果均为阳性,表明实验所用细胞为小鼠骨膜细胞。在炎症模型的诱导实验中,CCK-8和q RT-PCR结果表明10 ng/m L的LPS可成功诱导骨膜细胞炎症表型,q RTPCR结果表明M1型巨噬细胞成功被诱导。CCK-8结果显示,DBBM组的M1细胞增殖活性比对照组提高;Transwell迁移实验表明,实验组可吸引M1巨噬细胞的迁移;q RT-PCR结果显示:实验组的Inos、Tnfa、Il1b基因在m RNA表达水平均下调;免疫荧光结果显示:实验组胞质内INOS的表达下调;ELISA表明:TNFA和IL1B的分泌量在实验组显著下降,结果均存在统计学差异。结论:在体外,DBBM通过影响骨膜细胞旁分泌,抑制M1巨噬细胞的炎症表达,增加局部M1巨噬细胞的数量,从而调节初始免疫反应。