目的研究Per2基因过表达对于U87胶质瘤干细胞放疗敏感性的影响。方法1.应用无血清的培养基(在其中添加生长因子bFGF、生长因子rhEGF、B27试剂和N2添加剂)和悬浮培养法诱导U87胶质瘤干细胞,然后用过表达慢病毒转染胶质瘤干细胞,在荧光显微镜下观察转染效率。2.细胞转染后,利用嘌呤霉素对转染慢病毒的细胞进行筛选,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印记法检测过表达组、空载体组和正常组U87胶质瘤干细胞内Per2基因表达情况。3.给予8mV 100cGy X线照射三组实验细胞,并分别于24h,48h后,应用蛋白质印记法检测各组细胞γH2AX蛋白表达情况。4.给予8mV 100cGy X线照射三组实验细胞,并分别于24h,48h后,应用Annexin V-PE/PI流式细胞术检测三组实验细胞凋亡情况。结果1.U87胶质瘤干细胞在MOI值为17的条件下,细胞转染效率约为90%,随着MOI值的增加,转染效率没有明显变化。2.用实时荧光定量PCR法和蛋白质印记法检测发现过表达组干细胞内Per2基因表达升高,明显高于其他两组细胞(P<0.05),而空载体细胞组和正常细胞组Per2基因的表达情况无明显差异(P>0.05)。3.给予三组实验细胞X线照射24h,48h,过表达细胞组干细胞的γH2AX蛋白表达量均高于其他两组细胞(P<0.05),而空载体组细胞和空白组细胞γH2AX蛋白表达量无明显差异(P>0.05),并且随着时间增加,各组细胞γH2AX蛋白表达量均有所上升4.给予三组实验细胞X线照射24h,48h,过表达组干细胞在24h和48h的细胞凋亡率分别为(45.3±0.75)%和(51±0.82)%,空载体组细胞在24h和48h的细胞凋亡率分别为(25±0.54)%和(29.8±0.49)%,空白组细胞在24h和48h的细胞凋亡率在24h和48h为(22.1±0.48)%和(26.9±0.50)%,过表达组干细胞细胞凋亡率明显高于空载体组和空白组细胞(P<0.05),而空载体组细胞和空白组细胞之间细胞凋亡率没有明显差异(P>0.05),并且随着放疗后的时间延长,三组细胞的凋亡情况随着时间增加而上升。结论1.使用Per2基因过表达慢病毒转染U87胶质瘤干细胞成功得到Per2基因稳定过表达的U87胶质瘤干细胞株。2.Per2基因过表达时,增加了U87胶质瘤干细胞在接受放疗后DNA损伤标志物γH2AX蛋白的表达量,明显促进细胞DNA的损伤,导致细胞接受放疗后细胞凋亡情况增加,并且随着时间延长,细胞的DNA损伤情况和细胞凋亡情况也随之上升3.Per2基因过表达时,可明显增强U87胶质瘤干细胞对于放疗的敏感性。