【摘 要】
:
目的研究Per2基因过表达对于U87胶质瘤干细胞放疗敏感性的影响。方法1.应用无血清的培养基(在其中添加生长因子bFGF、生长因子rhEGF、B27试剂和N2添加剂)和悬浮培养法诱导U87胶质瘤干细胞,然后用过表达慢病毒转染胶质瘤干细胞,在荧光显微镜下观察转染效率。2.细胞转染后,利用嘌呤霉素对转染慢病毒的细胞进行筛选,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印记法检测过表达组、空载体组和正常组U87胶质
论文部分内容阅读
目的研究Per2基因过表达对于U87胶质瘤干细胞放疗敏感性的影响。方法1.应用无血清的培养基(在其中添加生长因子bFGF、生长因子rhEGF、B27试剂和N2添加剂)和悬浮培养法诱导U87胶质瘤干细胞,然后用过表达慢病毒转染胶质瘤干细胞,在荧光显微镜下观察转染效率。2.细胞转染后,利用嘌呤霉素对转染慢病毒的细胞进行筛选,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印记法检测过表达组、空载体组和正常组U87胶质瘤干细胞内Per2基因表达情况。3.给予8mV 100cGy X线照射三组实验细胞,并分别于24h,48h后,应用蛋白质印记法检测各组细胞γH2AX蛋白表达情况。4.给予8mV 100cGy X线照射三组实验细胞,并分别于24h,48h后,应用Annexin V-PE/PI流式细胞术检测三组实验细胞凋亡情况。结果1.U87胶质瘤干细胞在MOI值为17的条件下,细胞转染效率约为90%,随着MOI值的增加,转染效率没有明显变化。2.用实时荧光定量PCR法和蛋白质印记法检测发现过表达组干细胞内Per2基因表达升高,明显高于其他两组细胞(P<0.05),而空载体细胞组和正常细胞组Per2基因的表达情况无明显差异(P>0.05)。3.给予三组实验细胞X线照射24h,48h,过表达细胞组干细胞的γH2AX蛋白表达量均高于其他两组细胞(P<0.05),而空载体组细胞和空白组细胞γH2AX蛋白表达量无明显差异(P>0.05),并且随着时间增加,各组细胞γH2AX蛋白表达量均有所上升4.给予三组实验细胞X线照射24h,48h,过表达组干细胞在24h和48h的细胞凋亡率分别为(45.3±0.75)%和(51±0.82)%,空载体组细胞在24h和48h的细胞凋亡率分别为(25±0.54)%和(29.8±0.49)%,空白组细胞在24h和48h的细胞凋亡率在24h和48h为(22.1±0.48)%和(26.9±0.50)%,过表达组干细胞细胞凋亡率明显高于空载体组和空白组细胞(P<0.05),而空载体组细胞和空白组细胞之间细胞凋亡率没有明显差异(P>0.05),并且随着放疗后的时间延长,三组细胞的凋亡情况随着时间增加而上升。结论1.使用Per2基因过表达慢病毒转染U87胶质瘤干细胞成功得到Per2基因稳定过表达的U87胶质瘤干细胞株。2.Per2基因过表达时,增加了U87胶质瘤干细胞在接受放疗后DNA损伤标志物γH2AX蛋白的表达量,明显促进细胞DNA的损伤,导致细胞接受放疗后细胞凋亡情况增加,并且随着时间延长,细胞的DNA损伤情况和细胞凋亡情况也随之上升3.Per2基因过表达时,可明显增强U87胶质瘤干细胞对于放疗的敏感性。
其他文献
目的:本研究旨在应用超高效液相色谱-质谱法(LC-MS)对急性冠脉综合征(ACS)患者和对照组的尿样进行代谢组学研究,进一步探讨急性冠脉综合征的发病机制。方法:本研究纳入了2017年1月至2018年9月在新疆自治区人民医院心内科明确诊断的患者。急性冠脉综合征组48例(急性心肌梗死35例,不稳定性心绞痛13例)及对照组12例。通过使用超高效液相色谱质谱联用仪对尿液样本进行分离,通过应用主成分分析(P
茄尼醇是植物体内重要的次生代谢产物,在植物生长发育过程中起着重要的调控作用。它是含有45个碳原子的反式长链聚异戊二烯,根据萜类的分类属于多萜的范畴。另外,由于其具有重要的药用价值及经济价值,对其研究较为广泛。本研究通过克隆烟草茄尼醇合成过程中的关键酶茄尼基焦磷酸合酶基因SPS,构建了pBI121-SPS和pBI121-DXS-SPS过表达载体,通过烟草遗传转化进行基因过表达植株茄尼醇含量分析,探讨
恶性肿瘤严重威胁着人类的健康与生命,流行病学调查表明,肿瘤的侵袭和转移是影响预后和导致复发的关键因素,是造成大多数肿瘤病人死亡的主要原因。经过多年的发展,针对肿瘤以
在马克思思想发展历程中,赫斯哲学思想促使青年马克思将研究视角扩展至经济学领域,实现哲学与经济学的有机结合,是马克思创立唯物史观的重要因素。二者之间思想关系的研究,对于进一步揭示青年马克思思想具有重要学术价值。该课题研究能够帮助我们更好的理解马克思早期思想的形成历程、转变过程与发展方向。赫斯与青年马克思之间的思想关系复杂,单纯从相关文本发表时间先后顺序判定赫斯与青年马克思的思想关系未免有些失实。首先
6,8-二取代喹啉(简记为AM219)是一种全新的多靶点抗阿尔茨海默症药物。AM219和主要代谢物(简记为AM219B)均是抗阿尔茨海默症的活性物质。本文采用微透析技术研究AM219及其代
目的须癣毛癣菌从临床角度和宿主亲缘性上可被分成亲人和亲动物性两类,分别容易导致人体上半部分(如头面部)和下半部分(如足、指/趾甲)的感染,本研究拟从形态学、生理试验、分子生物学和药敏试验四个方面对不同部位分离的须癣毛癣菌行一对比分析,明确二者是否存在差异。方法选取武汉市第一医院皮肤科近3年从就诊患者不同身体部位分离的须癣毛癣菌48株,通过再培养形态学观察、尿素酶试验、PCR扩增ITS靶位和D1-D
氨甲喋呤(MTX),其结构与叶酸及二氢叶酸还原酶抑制剂类似。常用于治疗风湿、肿瘤、炎症和皮肤疾病等。近年来,甲氨蝶呤是治疗儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)的基础药物。它可
脱落酸(ABA)是一种植物激素,在种子休眠萌发、根系结构、叶片衰老、气孔调节和非生物胁迫耐受等方面起着重要作用。9-顺式-环氧类胡萝卜素双氧合酶(9-cis-epoxycarotenoid di
目的:本研究旨在探讨姜黄素(Curcumin,Cur)缓解神经病理性疼痛的可能作用机制。方法:选用6-8周龄,体重20±2 g的C57BL/6雄性小鼠作为实验小鼠,采用坐骨神经选择性结扎法(Spared
近年来,人随着们对于烟草的消费的逐渐上升,对烟草的产量和质量提出了更高的要求。因此,为了提高烤烟生产的产量和质量,为我国的烟草工业的稳步健康发展提供科学依据,通过大