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肺癌是当今世界范围内发病率最高,死亡率最高且治疗效果相对较差的癌症。随着我国人口增长,社会老龄化,环境污染加剧等影响,肺癌已经成为我国居民主要死亡病因之一,因此对于肺癌研发高效、高靶向的抗癌药物已迫在眉睫。适体是一类单链短序列寡核苷酸分子,因能与靶标高特异性高亲和力结合,体内低免疫原性,易修饰生产等优点,正成为肿瘤靶向治疗领域的新兴分子药物。第一个登上人体临床试验的抗肿瘤适体药物AS1411,因其能特异性靶向肿瘤细胞表面生物标志物核仁素,对多种肿瘤表现出强劲的杀伤作用。但现阶段,关于AS1411药理学的研究报道主要关注其对细胞周期及凋亡(Ⅰ型程序性死亡)的影响,还没涉及自噬(Ⅱ型程序性死亡)领域。本课题以非小型肺癌A549细胞为研究对象,首先通过免疫荧光实验验证了AS1411能通过靶标膜受体核仁素进入A549细胞;继而考查了AS1411不同浓度、处理不同时间对A549细胞形态及细胞活性的影响;再用Western Blotting及EGFP-LC3荧光绿斑实验分别证实了AS1411对A549细胞自噬的诱导。为了探寻AS1411诱导A549细胞自噬的分子机制,课题对自噬调控中心分子mTORC1的活性进行了分析。Western Blotting结果显示,AS1411能显著抑制mTORC1下游两底物p70S6K1及4E-BP1的活性,说明mTORC1活性受到抑制,继而诱发了细胞自噬。但是在三次独立实验中,均发现72 h处Akt被异常激活,进一步研究发现该现象与AS1411削弱mTORC1/IRS1及p70S6K1/IRS1的负反馈有关。由于自噬对于肿瘤细胞发挥着“双刃剑”的作用,因此在明确AS1411诱导A549细胞自噬分子机制后,课题进一步探讨了此诱导性自噬的性质。通过借助自噬抑制剂LY294002及CCK-8实验,发现AS1411诱导的自噬属于肿瘤细胞“保护”性质。最后,本课题利用碘化丙啶(PI)单染,借助流式对AS1411处理后A549细胞周期进行了分析。结果发现,AS1411能极显著地引起细胞G2期阻滞,该现象可能与AS1411抑制mTORC1活性,妨碍胞内蛋白质合成有关。综上所述,AS1411能通过抑制mTORC1活性,抑制胞内蛋白合成,诱导A549细胞发生保护性自噬并导致细胞G2期阻滞。