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JWA基因是周建伟等1998年发现和克隆的受维甲酸诱导的新基因,登录在NCBI基因库中的编号为AF070523。到目前为止,除我们实验室外尚未发现有其他学者对JWA基因进行系统研究的报道。JWA基因cDNA包含2114个核苷酸,编码188个氨基酸,初步分析结果表明JWA在细胞体内的功能较为活跃。本研究的目的在于通过对JWA基因结构的分析,寻找研究JWA基因功能的切入点;同时建立检测JWA表达产物的方法,为研究JWA基因提供有力工具。 应用聚合酶链式反应分析人基因组DNA,检测JWA基因中是否存在内含子。根据JWAcDNA序列,设计了多对能够扩增JWA基因不同片断的引物;分别以人基因组DNA和JWA cDNA为模板,交叉扩增JWA基因的不同片段序列。结果从两个模板扩增出的产物大小一致,初步表明JWA基因中不含有内含子。 用分子克隆技术分别构建了含JWA启动子和大鼠JWA同源基因的重组体,经过测序获得JWA启动子621bp序列和大鼠JWA编码区序列。在启动子序列中含有佛波酯反应元件(TRE),应激反应元件、Hemin、NFκB、热休克反应元件及ATRA反应元件的半位点(SRE),提示JWA基因表达可能受多种因素调节。进一步用TPA、全反式维甲酸、4HPR等诱导分化剂处理K562、NB4、NIH3T3三种细胞株和M3型白血病人原代培养的白细胞,观察JWA在转录水平上的变化,结果发现:JWA表达对诱导分化剂的作用表现出相当活跃的变化;TPA和4HPR两种药物对JWA的表达调节方向与细胞株的性质有关;而M3型白血病细胞被ATRA诱导可能是其它诱导分化剂调节 南京医科大学硕士中fi沦文J帅表达的前提。尽管这些结果还不足以阐明 j帅基因的功能特点,懒示IWA基囚结构与功能之间存在看必然的联系,并为研究它的功s测一了方后和刻*。 将大鼠J帅编码区序列与人J帅基因比较,发现4个核替站相应4个氨基酸不同,推汉 JWA基因在大鼠和人的细胞中生物学功另可能相近。J帅在这两个跨度较大的种属中呆持 了相 寸稳定的DN A序列,提示该基因在生物删匕过程中可h测呆守。 为确定J帆表达严物在细胞内的冰;构建了J WAWA,以i厂荧光重纽体,利用基因转染4支术,将重组体整合入培养细胞的基因纽**A中;使其在培养乡胞中稳定表达。In厂P荧允融合蛋白,在激光共聚焦显敝下间舢蔡J帅在细胞生活状态下的分抑青况。结果提示门WA蛋白分布在细胞浆内,在核膜边贼较多的聚集,对圭H脓形成刨莫状,这些者卜 全月包胃架特别删管蛋白在5[0)泡内丙分布相{,。 运用机免疫吸附侧4支术,对制备的两株兔抗JWA多克降抗体进行了鉴定,这两郴元体均有附的剂量朋关系,在1:1(北们勺能与抗原颇并达到#钞于的和b腹。采用W匕匕111 net方法,S红卯不同来源细胞中 JWA表达产物,结果在人源性、鼠源性细胞蛋白叫V有特异性蛋白条带出现,其大小与预测的JWA蛋白肝量一致,丁以确定这个条带就是J叭表达产物Z 用抗J帅抗体对多种肿瘤组织进jyffo疫绷b 红保讨了JWA蛋白表达与肿瘤的关系。 揪寸以上实验结果,{峨什J从多方面初步了解了J帅基因的基木结构和功能。近期课题组又在研冗J帅基因参与细胞分化和凋亡小Z节、辆细H腋激反应调节等方面取得了有意义的研究成果,为进一步全面阐明J帅基固的生物学功S删了有价值的邯卜