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椎间盘是脊柱运动单位中重要的部分，IVDD最常引起的病变是椎间盘源性下腰痛（Discogenic Low Back Pain，DLBP）是临床上骨科的多发病、常见病，对人类健康影响巨大。下腰痛病因极其复杂，其中腰椎间盘退变被认为是最基本的原因。近年来研究表明，椎间盘细胞凋亡、椎间盘组织的炎症反应可以引起和加重椎间盘的退变，因此很多研究通过抑制髓核细胞凋亡和调节炎性因子来减缓椎间盘退变。 对于早期IVDD而言，症状轻、缓解快，因而常规保守治疗是最为有效的治疗方案。中医中药在治疗退变性疾病方面拥有自身的优势，因而顺应临床需要应用实验手段对其机理进行更深层次的研究显得非常必要。为进一步明确炎性因子与凋亡在椎间盘退变过程中的作用，同时探索独活寄生汤治疗退变性疾病的机制，设计了本实验。本次研究旨在通过建立椎间盘动物模型及独活寄生汤的后期干预，运用包括ELISA、HE、免疫组化、TUNEL凋亡检测等多种实验方法，阐明独活寄生汤预防、治疗IVDD的作用机理。通过详实的实验数据为中医药延缓、甚至治疗椎间盘退变性疾病提供科学理论支持。 目的： 1.通过对兔行纤维环穿刺后，椎间盘退变的大体形态、组织化学的观察，血清学指标的检测，建立一种可行的椎间盘退变动物模型。 2.通过对术后2、4、6W后取材的三组椎间盘组织中Caspase-1、IL-1β表达情况的对比分析，观察独活寄生汤干预后的治疗作用，探讨治疗作用的机制。 3.通过对三组血清标本的ELISA行对比分析研究，可以从血清学方面印证形态学的论断，为独活寄生汤治疗IVDD、DLBP提供更加详实可靠的实验证据，明确其对椎间盘退变疾病的预防和治疗作用。 方法： 1.经纤维环穿刺兔椎间盘退变模型的建立我们在前期文献检索与预实验的基础上，结合各模型特点与自身实际，最终选用兔作为实验对象，通过纤维环穿刺建立动物模型。新西兰大白兔40只（6月龄），雌雄不限，由第四军医大学实验动物中心提供，体质量（2.5±0.5）kg。所有入选动物随机分为3组（除外预实验4只）：空白组（12只）、模型组（12只）、中药组（12只），给予单笼饲养。经适应性喂养1W后，对三组经L3/L4、L4/L5椎间穿刺建模。建模前摄腰椎X线正侧来除外腰椎病变或畸形，于造模成功后的第4W行X线、MRI加以确认。 2.独活寄生汤的干预经预实验后，剩余36只实验动物给予每天2次灌胃处理。空白组与模型对照组只给予蒸馏水灌胃，2次/日；中药实验组，行独活寄生汤灌胃，2次/日。自灌胃起2、4、6W三个时间点分别经下腔静脉取血，处死后截取兔腰3/4节段和腰4/5节段椎间盘。观察取材时椎间盘的大体形态，通过HE染色了解椎间盘退变的大体形态，TUNEL染色识别细胞凋亡状况；通过免疫组化测量Caspase-1、IL-1β的表达水平；ELISA检测血清中Caspase-1、IL-1β的状况。 3.实验数据分析应用SPSSl9.0统计学软件分析，用均数±标准差((x)±s)表示计量资料，调整的?2检验适用于率的比较、计数资料；正态性和方差齐性资料适合单因素方差分析（ANOVA），组间两两比较应用LSD检验；如不属于正态和方差齐，则应用秩和检验。如P＜0.05认为有统计学意义。 结果： 1.HE染色：随着时间推移组织形态明显变化，纤维环结构紊乱，髓核向心性皱缩、髓核细胞减少，纤维软骨化，软骨终板变薄；基质呈波浪形不均匀，纤维环层状结构部分断，纤维软骨样细胞出现。 2.免疫组织化学染色结果：Caspase-1、IL-1β均于髓核、终板细胞的胞质和胞核表达。其中Caspase-1、IL-1β于空白组未出现退变的髓核、终板中表达弱阳性，6W后呈强阳性；中药组Caspase-1、IL-1β予独活寄生汤灌胃后表达显著下降。Caspase-1、IL-1β浓度随着时间变化，IVDD的不断进展Caspase-1、IL-1β的浓度不断提高，组间差异明显。空白组Caspase-1、IL-1β的OD值远远低于模型组与给药组，P<0.05，差异具有统计意义；同中药组相比，模型组TUNEL阳性细胞率较高，P<0.05，差异具有统计意义。中药组同模型组相比，中药组Caspase-1、IL-1β随时间表达增强趋势不明显，到6W后呈弱阳性或阴性表达。 3.TUNEL染色结果：随着时间变化，细胞凋亡逐渐增多，模型组细胞逐渐稀疏，胞质出现空泡化，棕黄色凋亡细胞众多，清晰可见。中药组胞核较大，未出现空泡化，无多核细胞与细胞团。中药组凋亡细胞率相较于模型组大为下降，P＜0.05，差异具有统计意义。 4.ELISA检测：Caspase-1、IL-1β均表达于血清当中，与空白组相比，经穿刺造模的2组血清中Caspase-1、IL-1β的含量明显升高（P＜0.05）；与模型组相比，给药组中的Caspase-1和IL-1β的含量显著降低（P＜0.05）。 结论： 1.通过纤维环穿刺可造成兔纤维环破裂，髓核脱出，诱发椎间盘退变，本实验退变模型造模基本成功。 2.兔早期腰椎间盘退变中可见Caspase-1、IL-1β的过度表达，这表明两者均参与了退变过程，IVDD与细胞凋亡、炎性因子关系密切。 3.独活寄生汤对于早期IVDD过程治疗的确有效，可能是通过抑制凋亡过程中Caspase-1的表达，进而降低炎性因子的水平，延缓退变过程，但IVDD是一不可逆的过程，该治疗只能起到延缓退变的作用，但无法将Caspase-1、IL-1β恢复至建模前水平。