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盐酸克伦特罗是一种β2-肾上腺受体激动剂,畜禽食用后,可以显著提高其生长速率,使瘦肉相对增加。但易在动物体内沉淀,人食用含有该药残留的动物产品后,可引起食物中毒,严重者导致死亡。为此,盐酸克伦特罗被禁止在食品生产中应用,为了严格监督控制盐酸克伦特罗的滥用,各国出台了相关的法律法规,研究者开发了多种检测方法。本试验围绕盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制开展了四个层次的研究工作,对免疫学检测方法做了基础性研究。试验内容和结果如下：(1)盐酸克伦特罗完全抗原的制备：利用叠氮法将CL和牛血清白蛋白BSA、及卵清白蛋白OVA偶联产生免疫抗原CL-BSA和包被抗原CL-OVA。通过紫外扫描和蛋白电泳分子鉴定,发现偶联前后载体蛋白OVA、BSA的吸收峰发生改变,电泳结果显示偶联物的分子量大于载体蛋白分子量。而且用CL-BSA免疫小鼠制备抗血清,用CL-OVA包被酶标板,检测得到的抗体可以和游离的CL发生特异性的结合反应。(2)盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备：采用B淋巴细胞杂交瘤技术,以CL-BSA为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经PEG融合,在HAT选择培养基中选择培养,用间接ELISA方法鉴定出阳性克隆,再用有限稀释法使阳性杂交瘤细胞进一步克隆化筛选出阳性杂交瘤细胞株。成功筛选出7株杂交瘤细胞株(3)盐酸克伦特罗竞争ELISA法的建立：ELISA最佳反应条件为：包被抗原CL-OVA浓度为0.4μg/mL,单抗使用浓度为1：600抗体,最佳包被条件为4℃过夜16h,最佳封闭剂为2%BSA用pH7.4 PBS配制,37℃竞争反应时间约30min,线性范围是0-8ng/ml,灵敏度是0.2ng/ml。(4)盐酸克伦特罗胶体金免疫层析诊断方法的建立：采用免疫竞争法将抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上。并将人工合成的盐酸克伦特罗抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),人工合成的盐酸克伦特罗抗原与待测样品中盐酸克伦特罗竞争结合胶体金标记的抗盐酸克伦特罗单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测结果。灵敏度最低值是0.5 ng/ml。