研究背景：系膜细胞增殖是许多免疫介导的肾小球疾病的重要特征，持续的系膜增殖最终导致不可逆性肾小球硬化，抑制系膜细胞增殖是增殖性肾小球疾病重要的治疗策略。系膜细胞的生长是在细胞周期水平由各种细胞周期调节蛋白的精密调控来完成的，包括正调控蛋白——细胞周期蛋白（Cyclins）和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）和负调控蛋白——细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物（CKI）。体内外研究显示在系膜增殖过程中存在细胞周期调节蛋白表达的变化。咪唑立宾（MZR）是一种免疫抑制剂，通过竞争性抑制嘌呤合成的限速酶IMP脱氢酶和GMP合成酶导致细胞嘌呤合成障碍。MZR是否对系膜增殖具有抑制作用以及机制如何尚不很清楚。本研究以细胞周期调节蛋白为切入点，从临床人体试验、体内动物实验、体外细胞实验三个方面探讨MZR对系膜细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：临床试验：前瞻、随机、对照试验，14岁-70岁经肾穿刺活检确诊为原发性IgA肾病、尿蛋白定量在0.5-3.5g/d、血肌酐≤4mg/dl的病人随机分为咪唑立宾组、氯沙坦组和两药合用组，每1-1.5个月进行常规体格检查并留取血尿标本，随访12个月，观察药物对尿蛋白及肾功能的影响。体内实验：制备实验性系膜增殖性肾小球肾炎的动物模型——抗Thy1肾炎大鼠模型，分为正常对照组、模型组、模型+MZR组，造模第1、3、5、7天留取肾组织（各时间点n=6）和血尿标本。检测肾功能和尿蛋白定量；观察肾脏组织病理学改变并计数肾小球内细胞数；间接免疫荧光法检测肾组织内BrdU（S期细胞标志物）和p27^kip1阳性细胞数；RT-PCR检测肾组织内cyclinD1、p27^kip1的mRNA表达；Western Blot检测肾组织内cyclinD1、CDK2、p27^kip1的蛋白表达。体外实验：原代培养大鼠系膜细胞无血清同步24h后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS+MZR组。MTF法检测细胞数；BrdU标记法检测S期细胞；流式细胞仪检测细胞周期；Western Blot检测cyclinD1、cyclinE、CDK2和p27^kip1以及降解p27^kip1的S期激酶相关蛋白2（Skp2）蛋白的表达；免疫荧光染色检测p27^kip1在细胞内表达与定位；实时定量PCR检测p27^kip1、Skp2的mRNA表达；使用脂质体转染法转染pIRES-GFP和pIRES-GFP-Skp2质粒。结果：在人体系膜增殖性肾炎——原发性IgA肾病患者，MZR治疗能有效减少尿蛋白。在实验性系膜增殖性肾小球肾炎的动物模型——抗Thy1肾炎大鼠模型，MZR能够抑制大鼠系膜细胞增殖，减少肾小球内细胞计数和S期细胞数，改善组织病理学变化，减少尿蛋白排泄量。与正常对照组比较，肾炎模型组大鼠肾组织cyclin D1、CDK2的表达上调，p27^kip1的蛋白表达下调；与模型纽相比，MZR治疗组大鼠肾组织内cyclin D1、CDK2的表达下调（P＜0.05），p27^kip1的蛋白表达显著上调（P＜0.05），但p27^kip1的mRNA水平无显著变化（P＞0.05）。在体外，MZR剂量依赖性抑制20％FCS刺激的大鼠系膜细胞增殖（50ug/ml＞5ug/ml＞0.5ug/ml），抑制细胞由G0／G1期向S期转化，减少S期细胞数目，诱导细胞出现G1／S阻滞。与20％FCS组相比，20％FCS+MZR组cyclin D1、cyclin E、CDK2的表达下调（P＜0.05），p27^kip1的蛋白表达显著上调（P＜0.05）。MZR维持p27^kip1在细胞核的高表达，但对p27^kip1的mRNA表达无显著影响（P＞0.05），提示MZR对p27^kip1的调控发生在转录后或降解水平。MZR可以抑制能降解p27^kip1的Skp2蛋白和mRNA表达，转染pIRES-GFP-Skp2质粒使Skp2过表达可以抵消MZR升高p27^kip1蛋白水平的作用。结论：MZR能够有效抑制系膜细胞增殖。MZR能够下调系膜细胞增殖时cyclinD1、cyclinE、CDK2的表达，上调p27^z（kip1）蛋白在细胞核的表达，从而抑制细胞由G0／G1期向s期转化，诱导系膜细胞出现G1／S阻滞。MZR上调p27^kip1的蛋白表达至少部分是通过抑制Skp2介导的p27^kip1降解实现的。