目的:　　 1．探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA，mtDNA)ND2基因A4833G、A5301G基因突变与2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)的相关性。　　 2．分析基因变异家系情况与T2DM临床资料及其糖尿病慢性并发症之间的关系，为T2DM及其并发症的遗传危险因素评估提供参考。　　 方法:　　 1．临床及实验室检查：收集自2009年3月-2009年10月温州医学院第一附属医院T2DM且有慢性并发症的患者血样267例，T2DM患者均根据1997年WHO糖尿病诊断标准确诊，并记录患者常规生化指标、基本临床资料、慢性并发症情况、糖尿病家族史、胰岛素使用情况、病程及其他合并症等。369例健康体检者作为对照组。　　 2．用DNA提取试剂盒提取所有外周血标本的全基因组DNA，-20℃保存备用。　　 3．PCR扩增：采用覆盖整个mtDNA且具重叠序列的第6、7、8对特异性引物对所有标本的线粒体全基因组进行PCR扩增，直接测序后应用Chromas、CondoneCodeAligner、DNAStar等分析软件与剑桥参考序列(revisedCambridgeReferenceSequence，rCRS)进行比对。　　 4．分析mtDNAND2编码基因变异位点的氨基酸变化；Clustalx生物软件分析碱基序列保守性；分析氨基酸变异情况，预测蛋白二级结构。　　 5．对2例A4833G突变进行家系调查。　　 6．结合SPSS统计学软件分析比较T2DM组和对照组中A4833G、A5301G突变与糖尿病慢性并发症之间的相关性。　　 结果:　　 1．通过对267例T2DM且有慢性并发症的患者进行线粒体全基因组测序分析，结果共发现ND2基因677个碱基变异，错义突变数157个；369例对照组共发现881个碱基变异，错义突变数195个。错义突变数在两组中无显著性差异（P＞0.05）。　　 2．研究共发现A4833G、A5301G错义突变位点两组中差异有显著性(P＜0.05)，保守性分析这2个错义突变位点在不同物种中保守指数均为50％，对A4833G、A5301G所在的ND2基因进行蛋白质二级结构预测，发现氨基酸位于跨膜疏水区域，保守性分析提示A4833G(T122A)位于蛋白保守区域。　　 3.267例T2DM共发现16例A4833G突变；24例A5301G突变。对携带有A4833G突变的家系进行调查，发现共5例有家族遗传史。对2例有A4833G突变的家系分析发现其符合线粒体糖尿病母系遗传特点。　　 4．通过对267例T2DM患者临床并发症及生化指标的比较发现，有并发周围神经病变的患者中A5301G发生率较无周围神经病变的患者高(P=0.034)。其中TC水平在有无携带A4833G突变的两组间有显著性差异(P=0.014)；胰岛素使用情况在有无携带有A5301G突变两组间有显著性差异(P=0.029)；而性别、起病年龄、病程、有无家族史、BMI、HbA1c、TG、LDL-C和HDL-C在两组间无显著性差异(P＞0.05)。　　 结论:　　 1．T2DM组和对照组中ND2蛋白编码基因的变异位点作统计学分析，发现它们在两组间分布都统计学意义，推测它们可能是多态性改变，但不能排除部分位点提高个体对T2DM的易感性。　　 2．统计发现A4833G、A5301G错义突变位点在T2DM组明显高于对照组中(P＜0.05)，且突变全部位于蛋白编码基因区，可能影响氧化磷酸化过程，导致ATP合成减少，胰岛β细胞能量供应不足，影响胰岛素的分泌，从而参与T2DM的发生。　　 3．线粒体基因糖尿病的临床症状复杂，携带有不同变异患者的临床表现各不相同，即使携带有同一变异因个体不同而临床表现差异很大。