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第一部分PLD2在结肠癌组织中的表达及临床意义目的:检测PLD2在结肠癌组织及远端相临的正常结肠粘膜组织中的表达,探讨PLD2的表达与患者临床病理资料之间的关系。方法:1.采用免疫组织化学的方法检测PLD2蛋白在35例人结肠癌组织及其相应的远端正常结肠粘膜组织中的表达,并进一步分析PLD2蛋白在组织中的表达结果与患者临床病理特性特性之间的内在联系。2.采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)方法检测PLD2m RNA在人结肠癌组织、正常结肠粘膜组织以及结肠癌细胞中的表达水平。3.采取Western blot的技术检测PLD2蛋白在人结肠癌粘膜组织、正常结肠粘膜组织及结肠癌细胞株中的表达差异。结果:1.PLD2主要定位于结肠癌细胞浆与细胞膜中,相对于正常结肠组织,PLD2在结肠癌组织中表达明显增高(P<0.05)。PLD2的表达与结肠癌患者肿瘤瘤体大小有关(P<0.05)。2.PLD2的m RNA在结肠癌组织中的表达水平明显高于在与之相邻的正常结肠组织中的表达(P<0.05)。3.相对于正常结肠粘膜组织PLD2蛋白在癌组织中的表达水平明显升高(P<0.05),且PLD2在结肠癌SW480及SW620中有较高的表达水平。结论:PLD2在结肠癌组织及SW480与SW620细胞中均高表达,且PLD2的表达与结肠癌肿瘤体积的大小相关。第二部分沉默PLD2基因对结肠癌细胞增殖与迁移能力的影响及其机制的研究目的:观察沉默PLD2基因表达后结肠癌细胞增殖和迁移能力的变化及相关分子机制。方法:1.腺病毒干扰技术转染结肠癌SW480与SW620细胞株后,采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测结肠癌细胞转染前后PLD2的m RNA和蛋白表达水平的变化情况。2.采用平板克隆形成实验方法分别检测转染前后两株细胞增殖情况。3.通过Transwell小室法分别检测转染前后细胞迁移能力变化。4.采用Western blot法检测各组细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2(Metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白的表达变化。结果:1.转染PLD2 si RNA后结肠癌细胞PLD2 m RNA和蛋白的表达量显著下降(均P<0.01)2.沉默PLD2表达后两株细胞的增殖能力明显下降(P=0.000)3.特异性抑制PLD2表达后结肠癌细胞迁移能力明显下降(P=0.000)4.与正常组(未转染病毒)和空载组相比较,PLD2干扰组Cyclin D1及MMP-2蛋白表达明显下降(P=0.000)结论:特异性沉默PLD2基因表达引起的细胞增殖和迁移能力的下降可能与Cyclin D1和MMP-2表达下调密切相关,提示PLD2可能成为结肠癌治疗的新靶点之一。