目的：通过缺氧缺血，早产，脂多糖仔鼠感染导致脑损伤模型，运用“输合配穴”针刺法对其进行干预，通过神经行为学鉴定，观察S100B、NSE、Nogo-A、MAG、OMgp、caspase3、HIF-1表达，探讨针刺对脑损伤仔鼠脑组织中蛋白表达影响，探讨输合配穴在脑损伤修复方面的机制，为临床针刺治疗脑损伤提供理论和实验依据。材料与方法：1.建立缺氧缺血鼠、脂多糖感染及早产脑损伤模型以神经行为学及运用ELISA法测定S100B、NSE含量差异判断脑损伤程度评价模型。1.1缺氧缺血鼠模型的制备：新生小鼠4日龄，进行右侧颈总动脉结扎，然后将仔鼠放入8%氧气和92%氮气混合气体250ml密闭容器，其中放入无水氯化钙，钠石灰去除CO2及水份的影响。待仔鼠出现活动减少，呼吸增快，四肢抽搐，皮肤出现青紫的情况时，将仔鼠取出，放入母鼠身边继续喂养。1.2LPS模型的制备：乳鼠在出生后第3、4、5、6、7天，每天腹腔注射LPS（30,30,60,60,120ug/kg）连续注射以防止产生耐药性。1.3早产鼠模型的制备：每日下午18时以雌雄2：1比例将其合笼，次日8点以查到阴栓为判断标准，定为孕零天。将怀孕孕鼠21天行剖宫产，断颈法处死母鼠，使其仰卧位置于手术板上，消毒腹部皮肤，打开腹腔，暴露双侧子宫，挤出新生大鼠，置于37°C恒温水浴箱中保暖。取出全部新生大鼠的时间不超过2分钟。将新生仔鼠用代乳鼠进行喂养。2.将造模组分别分为输合配穴针刺干预组、未干预组，并设正常对照组，生后3天开始，进行神经行为学鉴定，分别于1、7、14、21天取大鼠脑组织实验室检测，探讨针刺对脑损伤仔鼠脑组织中S100B、NSE、Nogo-A、MAG、OMgp、caspase3、HIF-1蛋白表达影响，探讨输合配穴在脑损伤修复方面的机制。结果：1．本实验缺血缺氧组有6只孕鼠，分娩仔鼠59只，术后3天仔鼠死亡6只，剩余53只作为缺血缺氧实验组，实验过程中干预组死亡3只，非干预组死亡8只。本实验脂多糖仔鼠组共新生乳鼠60只，其中脂多糖组注射LPS，在注射过程中共死亡仔鼠6只，剩余仔鼠34只作为实验组，在实验过程中干预组死亡仔鼠3只，非干预组死亡仔鼠3只。本实验脂多糖孕鼠组共有6只孕鼠，6只孕鼠于孕17天接受腹腔注射LPS，注射3天后，有2只孕鼠死亡，3只孕鼠于22天后分娩仔鼠9只，三天内9只仔鼠全部死亡，1只孕鼠于孕23天分娩，不符合早产剔除。本实验早产组有6只孕鼠，于孕22天行剖宫产，共分娩仔鼠65只，手术3天后死亡仔鼠14只，剩余51只作为早产组，实验过程中无一只大鼠死亡。2．仔鼠体重：通过比较各组新生大鼠第7天和第21天体重，结果显示：各组干预组和未干预组相比未存在差异（P>0.05），第7、14天缺氧缺血干预组、缺氧缺血未干预组、脂多糖干预组、脂多糖未干预组、早产干预组、早产未干预组与正常组的体重比较存在显著差异（P<0.01），第21天，各组的体重比较差异已无统计学意义（P>0.05）。3.各组仔鼠第14天肝、脾、肾比较：通过对出生后第14天各组新生大鼠、肝、脾、左脑称重进行比较，各组间比较肝、左脑的重量没有差异P>0.05，脾的重量有显著差异P<0.01，组内的多重比较分析，脂多糖组脾的重量与缺氧缺血组和早产组有显著差异P<0.01，与正常组有差异P<0.05。4．新生鼠发育测验结果：对新生乳鼠进行神经生长发育测试后发现，平面翻正测试、悬崖回避测试、惊愕反射测试几项，两组之间比较有差异（p<0.05），前肢放置测试两组之间比较有显著性差异（p<0.01），其他几项比较无差异（p>0.05）。5．S100B，NSE分析：大鼠S100B，NSE的表达与脑损伤程度密切相关。第1、7、21天，各干预组和未干预组与空白对照组比较，差异有统计学意义（p<0.01），第1、7天，各组未干预组与干预组比较，差异无统计学意义（p>0.05），第21天，LPS和缺血缺氧处理的未干预组与干预组比较，差异有统计学意义（p<0.01）；早产未干预组与干预组比较，差异有统计学意义（p<0.05）。6.同一时点各组大鼠脑组织中Nogo-A的表达比较：比较各组新生大鼠生后各时间点脑组织切片Nogo-A蛋白的表达平均光密度值，结果显示：各组干预、未干预组各时间点脑组织Nogo-A白蛋白表达均高于空白对照组，各干预组在7、14、21d三个时间点脑组织Nogo-A蛋白的表达均低于各自未干预组；早产干预组在各时间点脑组织Nogo-A蛋白表达低于其他各组（p＜0.01）。7.同一时点各组大鼠脑组织中MAG的表达比较：比较各组新生大鼠生后各时间点脑组织切片MAG蛋白的表达平均光密度值，结果显示：各干预组在7、14、21d三个时间点脑组织MAG蛋白的表达均高于各自未干预组；早产干预组在各时间点脑组织MAG蛋白表达高于其他各组，各时间点脑组织MAG蛋白表达接近于空白对照组，但统计学分析有差异；各组干预、非干预组各时间点脑组织MAG蛋白表达均低于空白对照组（p＜0.01）。8.同一时点各组大鼠脑组织中OMgp的表达比较：比较各组新生大鼠生后各时间点脑组织切片OMgp蛋白的表达平均光密度值，结果显示：各干预组在7、14、21d三个时间点脑组织OMgp蛋白的表达均低于各自非干预组；早产干预组在各时间点脑组织OMgp蛋白表达低于其他各组，各时间点脑组织OMgp蛋白表达接近于空白对照组，但统计学分析有差异；各组干预、非干预组各时间点脑组织OMgp蛋白表达均高于空白对照组（p＜0.01）9.比较各组新生大鼠出生后第21天脑组织切片Nogo-A、MAG、OMgp阳性细胞平均光密度值：结果显示：造模各组平均光密度值均高于空白对照组，各组之间差异有统计学意义(P〈0.01)，LPS干预组，缺氧缺血干预组以及早产组的值均低于其未干预组的值，之间差异有统计学意义(P〈0.01)；经两两比较，Nogo-A、MAG、OMgp平均光密度值LPS未干预组、缺氧缺血未干预组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。在细胞凋亡率显示：空白组与LPS干预组、LPS未干预组、缺氧缺血干预组、缺氧缺血未干预组以及早产未干预组之间有显著差异(P〈0.01)，但与早产干预组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。10.各组大鼠脑组织中Nogo-A、OMgp的表达免疫组化比较：结果显示：胶质细胞阳性细胞核呈棕褐色深染，胞核较小，多为实性，呈梭形，圆形或杆状。各模型组与空白对照组相比，阳性细胞数明显多于空白对照组，输合配穴针刺干预组阳性细胞数少于未干预组。11.各组大鼠脑组织中MAG的表达免疫组化比较：结果显示：胶质细胞阳性细胞核呈棕褐色深染，胞核较小，多为实性，呈梭形，圆形或杆状。各模型组与空白对照组相比，阳性细胞数明显少于空白对照组，输合配穴针刺干预组阳性细胞数多于未干预组。12.各组大鼠脑组织中caspase3、HIF-1mRNA的表达：比较各组新生大鼠出生后第21天脑组织切片caspase3、HIF-1mRNA水平。结果显示：造模各组水平均高于空白对照组，与空白对照组之间差异有统计学意义(P〈0.01)，早产干预组caspase3、HIF-1mRNA水平与空白对照组比较，差异没有统计学意义（P＞0.05）,空白对照组表达含量相对校少，电泳条带较暗；各模型组表达相对含量增加，电泳条带较亮，各模型组未干预组表达含量相对高于其干预组，电泳条带较亮。13．各组大鼠脑组织细胞凋亡比较：凋亡的细胞呈均匀深染的黑色或棕色，细胞核消失，细胞膜光滑，细胞体缩小。各模型组与空白对照组相比，阳性细胞数明显多于空白对照组，输合配穴针刺干预组阳性细胞数少于未干预组。14．各组大鼠脑组织中caspase3、HIF-1蛋白的表达：比较各组新生大鼠出生后第21天脑组织切片caspase3、HIF-1mRNA水平。结果显示：造模各组水平均高于空白对照组，与空白对照组之间差异有统计学意义(P〈0.01)，早产干预组caspase3、HIF-1mRNA水平与空白对照组比较，差异没有统计学意义（P＞0.05）。空白对照组表达含量相对校少，电泳条带较细；各模型组表达相对含量增加，电泳条带增粗，各模型组未干预组表达含量相对高于其干预组，电泳条带较粗。结论：1.通过神经行为学鉴定以及蛋白表达发现，输合配穴针刺具有抑制脑损伤仔鼠可以促进MAG对脑神经的生长作用，同时抑制Nogo-A，OMgp对脑神经再生的抑制作用，促护神经细胞。2.通过神经行为学鉴定以及蛋白表达发现，使用“输合配穴”针刺法干预有效。3.输合配穴针刺具有抑制脑损伤神经细胞凋亡的作用。4.S100B，NSE，Caspase-3、HIF-1a的表达在脑损伤中起着重要的作用，少突胶质细胞中髓鞘相关蛋白表达在新生仔鼠不同阶段表现形式各组模型中不一致，并与脑损伤的程度具有一定的关系。