一直以来,家畜胃肠道线虫病的流行十分普遍,其中尤以捻转血矛线虫病为甚,严重影响着畜牧业的健康发展。针对这一情况,人们陆续开发了系列高效、广谱和低毒的驱虫药,但因抗药性问题的产生,使得可用药物的种类越来越少。有效解决这一问题的关键就是及时对耐药性问题做出诊断和明确耐药性的产生机制,但限于研究方法,目前仍没有较为系统的耐药性现状和耐药机理方面的信息。鉴于此,本研究以耐伊维菌素捻转血矛线虫为研究对象,对不同阶段与不同虫株的分泌产物进行Shotgun LC-MS/MS分析,以为揭示捻转血矛线虫的侵染机理、免疫逃避等的研究提供基础信息,并可为疫苗抗原、药物靶点或诊断标记的筛选提供新的思路,对今后捻转血矛线虫的防治研究具有重要意义。具体研究成果如下:(1)研究确定糖盐水漂浮法为捻转血矛线虫虫卵的最佳分离方法,并通过对8种备选培养基的筛选,确定M199培养基为捻转血矛线虫体外培养的最适培养基。(2)通过对捻转血矛线虫培养条件的优化和相应指标的测定发现,在虫体接种密度为30条时,标准耐药株和敏感株成虫最佳培养条件为M199培养基700μL、青链霉素混合液(100×)300μL、两性霉素B(2.5 mg/mL)20μL、伊维菌素(1 mg/mL)10 μL(仅耐药株加入),分泌性蛋白质最佳产生时间为75 h；其第三期脱鞘后幼虫培养体系与成虫一致,分泌性蛋白质收集时间为10 d。(3)采用Shotgun LC-MS/MS技术对第三期脱鞘后幼虫和成虫分泌物进行分析,结果在Uniprot蛋白数据库中共鉴定到分泌性蛋白质161个,发现耐药株特有蛋白质为24个,其中P糖蛋白13、β微管蛋白和乙酰胆碱门控氯离子通道ACC-2与虫体耐药性相关,敏感株特有蛋白质为62个,敏感成虫与耐药成虫共有蛋白质为57个;功能分析表明,这些蛋白质主要参与蛋白质水解、代谢、转录、蛋白质折叠、信号转导、离子输运、电子转运与分子结合等过程。(4)对捻转血矛线虫分泌性蛋白质的Western-blot检验显示,分泌性蛋白质大小在15 kDa～200 kDa不等,且不同虫株和同株不同阶段虫体的分泌性蛋白质之间确实存在差异,其中敏感虫株的条带较耐药株多,成虫较幼虫多。