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目的:探讨乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)发生浸润过程中肌上皮细胞对腺上皮细胞的作用。方法:随机抽样天津医科大学肿瘤医院单纯型乳腺导管原位癌共157例,根据细胞核级别,将导管原位癌分为高、中、低三个组别,对三组导管原位癌的肌上皮细胞指标,和腺上皮细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition EMT)相关标记物进行免疫组织化学染色,观察导管原位癌在发生发展过程在肌上皮细胞和腺上皮细胞的变化,并分别进行评分和统计;同时随机抽样含有导管原位癌成分的浸润性导管癌163例,根据ER、PR、HER-2、ki67等的表达状态进行分子分型分组,对各组病例进行EMT相关指标的免疫组化染色,并对免疫组化结果进行评分、统计,观察乳腺导管原位癌和浸润性导管癌之间的表达差异。根据免疫组化结果,进一步实施细胞学实验,来探讨在乳腺导管原位癌浸润发生过程中肌上皮细胞对腺上皮细胞的影响。选取肌上皮表型细胞系Hs578Bst,和腺上皮表型细胞系MCF-7;然后建立肌上皮细胞系Hs 578Bst与腺上皮细胞系MCF-7的共培养体系,构建乳腺导管原位癌模型。两种细胞非接触共培养,于37℃恒温孵箱中共培养72 h后,通过倒置显微镜观察共培养后腺上皮细胞MCF-7的形态学变化;通过划痕实验、transwell实验和Western blot及PCR等实验,检测腺上皮细胞MCF-7的功能学变化,EMT相关标记物的表达水平,EMT相关标记物基因表达的情况;通过ELISA实验检测共培后培养液中TGF-β1的浓度。结果:1、免疫组化结果显示:在单纯型乳腺导管原位癌中,随着细胞核级别的增加,肌上皮细胞出现表达不连续和缺失;腺上皮细胞中EMT相关指标(snail、zeb1)的表达,随着核级别的增加逐渐增强,E-cad的表达则随着核级别的增加逐渐减弱,并在导管原位癌各级别之间的表达差异具有统计学意义(P<0.05);在含有原位成分的浸润性导管癌中,浸润成分的snail、zeb1的表达高于导管原位癌成分;而E-cad在浸润成分的表达则低于原位成分。免疫组化结果提示:乳腺导管原位癌中,肌上皮细胞和腺上皮细胞均发生了变化,本课题组前期实验结果表明:人为诱导发生EMT改变的腺上皮细胞系与肌上皮细胞系间接共培养后,发现肌上皮细胞的细胞形态和功能学均发生了明显的改变,并且肌上皮细胞的微环境和内分泌功能也发生了明显的变化.本实验根据以上前期结果从另一个方向进一步研究肌上皮细胞对腺上皮细胞的作用,本研究对腺上皮细胞加入了外源性TGF-β1刺激作为阳性对照,仍采用肌上皮细胞和腺上皮细胞共培养的模式进入下一步的实验,实验结果如下:2、腺上皮细胞系MCF-7和肌上皮细胞系Hs 578Bst共培养72 h作为实验组;MCF-7细胞不做任何处理作为空白对照;MCF-7细胞加外源性TGF-β1刺激作为阳性对照;MCF-7加TGF-β1抑制剂作为阴性对照。四组细胞均在37℃孵箱内培养72 h后,观察结果显示:实验组MCF-7细胞和阳性对照组MCF-7细胞较空白对照组和阴性对照组MCF-7细胞发生了明显的形态学变化;通过划痕实验检测各组细胞的迁移能力,结果显示:实验组和阳性对照组MCF-7细胞迁移能力较空白对照组和阴性对照组明显增加;Transwell实验结果显示:实验组和阳性对照组MCF-7细胞侵袭能力较空白组和阴性对照组明显增加。Western-blot实验检测各组MCF-7细胞中EMT相关蛋白的表达量,结果表明:实验组和阳性对照组EMT相关蛋白表达较高,snail、twist、zeb1和vimentin上调,E-cad蛋白表达下调,而空白组和阴性对照组则相反;RT-PCR检测EMT相关标记物基因mRNA的表达水平,结果表明:E-cadherin下调,snail、twist、zeb1和vimentin上调,而空白组和阴性对照组则相反;ELISA实验结果显示:共培养后的腺上皮细胞培养液中TGF-β1的浓度和对照组相比呈现明显的递增趋势,并且差异具有统计学意义。结论:乳腺导管原位癌浸润发生的过程中,随着导管原位癌核级别的增加,snail和zeb1的表达呈现逐渐递增的趋势,E-cad的表达呈现逐渐递减的趋势。通过肌上皮细胞和腺上皮细胞的共培养,可以发现肌上皮细胞有效促进乳腺癌腺上皮表型细胞的侵袭和迁移能力。表明肌上皮细胞促进腺上皮细胞发生EMT,最终参与乳腺导管原位癌进展到浸润性导管癌的发生和发展。