【摘 要】
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本研究把PCR介导的DNA直接测序技术与DNA银染测序技术结合起来,对白暨豚、江豚三亚种和虎二亚种的线粒体DNA基因组细胞色素b基因进行了序列测定,结合有关已发表的DNA序列资料,用
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本研究把PCR介导的DNA直接测序技术与DNA银染测序技术结合起来,对白暨豚、江豚三亚种和虎二亚种的线粒体DNA基因组细胞色素b基因进行了序列测定,结合有关已发表的DNA序列资料,用系统发育分析软件包(PHYLIP)对它们进行分子进化遗传学研究。 在白暨豚、江豚和虎的细胞色素b基因研究中,均能从保存在-20℃条件下短至数月长达7年的组织样品中扩增出特异性片段,并能实现银染测序。结果显示,本研究所采用的方法不受组织样品保存条件的限制,同时使快速、低耗费地对物种进行DNA序列分析成为可能。 在细胞色素b基因序列上,东北虎与华南虎之间序列差异为1.53%(5/324碱基),与Arnason等(1995)发表的虎之间序列差异为1.53%(5/324碱基),与苏门答腊虎之间的序列差异为6.79%(22/324碱基);而华南虎与与Arnason等(1995)发表的虎之间序列差异为3.09(10/324碱基),与苏门答腊虎之间的序列差异为8.02%(26/324碱基)。可以认为虎东北亚种与华南亚种在DNA水平上的差异达到了亚种间差异的程度,两者约在61万年前曾有一个共同的祖先。 在白暨豚的三个个体中,LVE1与LVE2之间在细胞色素b基因序列上没有检测到差异,但LVE3与LVE1和LVE2之间有两个碱基的差异,分别为14989位的C→T和15022位的C→A。白暨豚与亚河豚间的序列差异为17.18%(56/326碱基),与江豚之间的差异为15.03%(49/326碱基)。系统发育分析结果表明:白暨豚与亚河豚没有直接共同的祖先,从而为白暨豚科的建立提供了有利的分子证据;现存的淡水豚类可能仅是外形上相似的物种群,Muizon(1984;1988a;
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