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[目 的]比较风湿性二尖瓣狭窄(RMS)患者与二尖瓣脱垂患者病变瓣膜IL-35表达量是否存在差异,并进一步分析不同病变程度的风湿性二尖瓣狭窄与IL-35之间存在的相关关系。比较同等浓度IL-35条件下对风湿性二尖瓣狭窄患者来源及健康对照组来源的外周血单个核细胞(PBMC)进行刺激是否存在不同的效果。明确IL-35与风湿性二尖瓣狭窄病变瓣膜狭窄程度的相关性,初步探索IL-35的生物学作用之一刺激自分泌的作用。[方 法]1、收集以二尖瓣狭窄为主的风湿性二尖瓣狭窄患者病变瓣膜组织,根据二尖瓣狭窄程度分为中度、重度二尖瓣狭窄两组及以二尖瓣脱垂患者病变瓣膜组织为对照组,分别为10例中度二尖瓣狭窄患者、12例重度二尖瓣狭窄患者、5例二尖瓣脱垂患者。其中,所有患者均行二尖瓣瓣膜置换手术。通过蛋白印迹法测定瓣膜组织中IL-35的相对表达量。2、收集RMS患者来源的PBMC及健康志愿者来源的PBMC,IL-35体外刺激PBMC获得最佳的刺激条件200ng/mLIL-35刺激48h,并在此条件下,刺激不同来源的PBMC,应用酶联免疫吸附技术测定刺激后PBMC胞内IL-35的表达量。[结 果]1、在瓣膜组织中,在总RMS病变瓣膜组织(n=22)中IL-35的相对表达量较对照组(n=5)差异有统计学意义(p=0.0036<0.05),RMS患者病变瓣膜中IL-35的表达量高。二尖瓣重度狭窄的病变瓣膜组织(n=12)IL-35的表达量较中度狭窄的病变瓣膜组织(n=10)与对照组(n=5)差异有统计学意义(p=0.0499<0.05,p<0.0006),二尖瓣重度狭窄的病变瓣膜组织中IL-35的表达量较对照组有显著增高;较中度狭窄的病变瓣膜组织有所增高。而中度狭窄的病变瓣膜组织中IL-35的相对表达量较对照组差异没有统计学意义(p=0.0733)。进一步通过Spearman’s相关性分析,IL-35的相对表达量和风湿性二尖瓣狭窄的病变程度成正相关(r=0.6459,p=0.0003)。2、比较不同的IL-35的刺激浓度和刺激时间,PBMC 在 200ng/mL IL-35 刺激 48h 后胞内 IL-35 表达量较 Ong/mL IL-35 刺激培养48h后的PBMC胞内IL-35的表达量差异有统计学意义(p<0.0001),在200ng/mL IL-35刺激48h后的PBMC胞内IL-35的表达量更高。在200ng/mLIL-35刺激48h后,RMS患者来源的PBMC胞内IL-35的表达量较健康志愿者来源的PBMC胞内IL-35的表达量差异有统计学意义(p=0.002),RMS患者来源的PBMC胞内IL-35表达量较健康志愿者来源的PBMC胞内IL-35的表达量更高。[结论]1、通过Western blot检测发现,明确在RMS的病变瓣膜中有IL-35的表达。2、较脱垂对照组,风湿性二尖瓣狭窄患者病变二尖瓣瓣膜组织中IL-35的表达量是增加的,且IL-35的表达量和瓣膜组织的狭窄病变程度是正相关的,即随着瓣膜狭窄程度的加重,IL-35的表达量越多。因此推断IL-35参与调节了风湿性二尖瓣瓣膜组织狭窄的病变的过程。3、在体外实验中,PBMC可以被IL-35刺激产生更多的IL-35,证实IL-35可以促进自我的合成,形成正反馈,有助于发挥其生物学作用。4、同样刺激条件下,风湿性二尖瓣狭窄患者来源的PBMC较健康对照组来源的PBMC经ELISA检测细胞内IL-35的含量更高,说明RMS机体的免疫应答的高敏感性。