酸枣仁中多种活性成分的分析方法研究

来源 :北京农学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wuxinghui_1975
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如今,现代快节奏的生活方式使人们承受更多的压力,据世界卫生组织调查,全球27%的人存在不同程度的睡眠问题。同时患有失眠、焦虑、抑郁等病症的人数逐年上升,因此安神类药物的需求量日益增大。苯二氮卓类西药治疗失眠虽然效果显著,但是容易出现头晕、乏力和嗜睡等不良反应,长期使用还会产生依赖性。酸枣仁(Zizyphi Spinosae Semen)为鼠李科植物酸枣的种子,具有养心、安神等功效,且属于药食同源原料,疗效显著的同时无副作用。因此,对于酸枣仁的深入研究变得更为迫切且重要。本研究主要建立了同时测定酸枣仁中多种活性成分的HPLC-MS-MS分析方法,在电喷雾离子源(Electrospray Ionization,ESI)模式下,采用多重反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)模式,选用Agilent Poroshell 120 EC-C18(2.1 mm×50 mm,4.0μm)色谱柱;以A(0.1%甲酸水溶液)-B(甲醇)流动相进行梯度洗脱,总流速0.2 mL/min;柱温40℃;进样量3 uL。洗脱梯度为:0~10 min 20%B~56%B,10~14 min 56%B~59%B,14~20 min 59%B~75%B,20~25 min 75%B~96%B,25~30 min 96%B~100%B,30~35 min 100%B。结果表明酸枣仁中木兰花碱、斯皮诺素、6’”-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷A1、酸枣仁皂苷B、酸枣仁皂苷B1的线性关系良好,平均加样回收率分别为97.72%、98.15%、97.51%、97.49%、98.3 1%、97.67%和97.66%,相对标准偏差均小于2.0%。本研究还建立了同时检测酸枣仁中白桦脂醇与白桦脂酸的 HPLC-ELSD 分析方法,采用 Agilent Poroshell 120 EC-C18(4.6 mm × 150 mm,4.0 μm)色谱柱;以甲醇:水:乙酸(88:12:0.05)溶液作为流动相进行等度洗脱;总流速1.0 mL/min;柱温40℃;进样量10μL;蒸发光温度85℃;载气流量1.5 L/min。结果表明酸枣仁中白桦脂醇与白桦脂酸的线性关系良好,平均加样回收率分别为96.94%与97.68%,相对标准偏差均小于2.0%。这两种分析方法灵敏度高、重复性好。为了进一步用于检测,本文通过L9(34)正交实验确立了提取酸枣仁中多种活性成分的最优提取条件,即:料液比为1:30g/mL,乙醇体积分数为50%,提取温度80℃,提取时间为3h。结果表明,在该条件下,酸枣仁中木兰花碱、斯皮诺素、6’”-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷A1、酸枣仁皂苷B、酸枣仁皂苷B1、白桦脂醇与白桦脂酸含量相对较高,其含量分别为(303.26±3.53)μg/g,(905.55±3.93)μg/g,(547.77±7.29)μg/g,(289.77±4.38)μg/g,(92.86±1.71)μg/g,(189.33±2.45)μg/g,(8.09±0.16)μg/g,(115.00±0.01)μg/g 和(442.57±0.02)μg/g;而酸枣仁中葛根素与荷叶碱的含量较少,均未达到检出限。在分析方法的建立和提取条件得到优化的基础上,本课题采用清炒的炮制方法,通过改变酸枣仁的生熟程度来观察其活性成分含量的变化。实验结果表明,酸枣仁中多种活性成分含量在150℃清炒0~50 min之间逐渐下降,且在65 min后,酸枣仁开始出油,至80 min时呈现广泛出油的状态。本研究发现了不同生熟程度酸枣仁活性成分含量的变化趋势,为今后生、炒酸枣仁产品的研究奠定了基础。
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