【摘 要】
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【研究背景及目的】在多种不同种类的肿瘤模型中,选择性的抑制Hsp90功能可诱导细胞增殖、细胞周期调节和凋亡过程中重要的信号分子的选择性降解。本研究在于探讨已进入临床试
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【研究背景及目的】在多种不同种类的肿瘤模型中,选择性的抑制Hsp90功能可诱导细胞增殖、细胞周期调节和凋亡过程中重要的信号分子的选择性降解。本研究在于探讨已进入临床试验的Hsp90抑制剂17-AAG在诱导细胞周期阻滞过程中Ubiquitin B的作用及其作用机制。【研究方法】人宫颈癌细胞系Hela细胞经17-AAG作用一段时间后,使用流式细胞仪和荧光分光光度计分别检测Hela细胞周期分布情况和细胞糜蛋白酶样蛋白酶体活性变化情况; siRNA干扰细胞中Ubb基因的正常表达后,再经17-AAG处理一段时间,利用Real Time PCR技术验证siRNA的干扰效应,流式细胞仪检测细胞周期的分布情况并用Western Blot检测细胞周期相关蛋白的表达变化。【研究结果】17-AAG处理24 h后,随着药物浓度的升高,HeLa细胞中G2/M期的细胞比例从未加药处理的(14.38±4.93)%上升到1umol/L时的(52.38±5.67)%,差异具有统计学意义(P<0.05),同时蛋白酶体活性显著增强,Western Blot检测发现17-AAG处理24 h后Cdk1和Hec1等周期相关蛋白下调,但Mad2的表达未见明显变化;利用siRNA干扰Ubb后,500 nmol/L和1 umol/L的17-AAG诱导的G2/M期细胞比例分别由转染前的(32.68±3.79)%和(43.98±1.99)%下降至转染后的(17.07±2.22)%和(25.95±6.69)%,同时Cdk1和Hec1的下调表达也被明显的逆转。【结论】Hsp90抑制剂诱导的Hela细胞周期阻滞主要由细胞周期检测点蛋白的范素化介导,Ubb可能是17-AAG诱导周期阻滞的一个靶点和宫颈肿瘤治疗的新靶点。
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