【摘 要】
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以新鲜猪血为材料，在低温条件下，离心除去血浆后，用生理盐水洗涤红细胞。向干净的红细胞中加入等体积的超纯水搅拌得溶血液。将溶血液依次进行乙醇.氯仿处理除去血红蛋白、热变
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以新鲜猪血为材料，在低温条件下，离心除去血浆后，用生理盐水洗涤红细胞。向干净的红细胞中加入等体积的超纯水搅拌得溶血液。将溶血液依次进行乙醇.氯仿处理除去血红蛋白、热变性、超滤浓缩和丙酮沉淀，得到了SOD粗酶液，再经过DE-FF柱层析、超滤浓缩及冷冻干燥得纯化SOD。本实验对热变性的温度(40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃)与时间(10min、15min、20min、25min、30min)、丙酮沉淀时丙酮与粗酶液体积比(0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0)及DE-FF柱层析的洗脱速度(1.0ml/min、1.5 ml/min、2.0 ml/min)与进样量(0.5ml、1.5ml、2.5ml)的最佳工艺参数进行确定，最后确定热变性的最适温度与时间分别为55℃和20min，丙酮与粗酶液的最适体积比为1.2，DE-FF柱层析的最适洗脱速度与进样量分别为1.5ml/min和1.5ml。经过上述纯化路线最终获得SODtN收率为58％，比活力7357.224U/mg，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，纯化的猪血Cu/Zn-SOD达到电泳纯。
对纯化的猪血Cu/Zn-SOD的理化性质进行分析，结果表明：猪血Cu/Zn-SOD亚基分子量为16.069kDa，分子量为32.138kDa。同时发现超氧化物歧化酶是一种对热和酸碱度稳定性较好的酶。温度在低于60℃时，猪血Cu/Zn-SOD活性相对稳定。在pH5.0～9.0条件下，酶的活力相对稳定，并且在pH7.0～8.0时酶活性为最高，但在pH<5.0和pH>9.0的情况下，此酶很容易失活，在pH=12.0时酶完全丧失活性。
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