论文部分内容阅读
目的 1.明确细胞凋亡抑制基因survivin及其相关因子caspase-3、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）在人骨肉瘤组织中的表达状态,探讨其与骨肉瘤恶性生物学行为的关系。 2.观测反义寡核苷酸（ASODN）体外封闭人骨肉瘤细胞survivin基因表达、诱导细胞凋亡效应及其对化疗药物顺铂（DDP）的增效作用。 3.探讨反义核酸技术与传统化疗联合应用,干预裸鼠荷骨肉瘤生长的综合治疗途径。 方法 1.采用原位杂交、免疫组织化学技术、DNA原位末端标记技术（TUNEL法）检测38例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、5例正常骨组织中survivin mRNA表达及骨肉瘤组织caspase-3、cyclin D1蛋白表达状态和细胞凋亡情况;比较分析骨肉瘤中survivin mRNA表达与各因子表达的关系及其意义。 2.设计合成特异性靶向survivin的ASODN,以脂质体为载体,按不同浓度和时间对人骨肉瘤OS-732细胞进行转染,并设空白、正义（SODN）对照组同步比较。镜下观察各组细胞生长状况,采用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测各组细胞中survivin mRNA、蛋白表达状态,流式细胞仪（FCM）、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡水平和形态变化,MTT法检测细胞生长抑制情况,激酶活性测定法检测细胞中caspase-3活化程度。 在ASODN单独转染封闭OS-732细胞survivin基因表达基础上,增设DDP处理组及其与ASODN联合作用组,比较联合应用组与各单“药”组细胞生长状态差异。采用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测各组细胞sur.vivin mRNA、蛋白表达状态,FCM、AO/EB染色法检测细胞凋亡水平和形态