大豆凝集素的检测、纯化和对大鼠抗营养机理的研究

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该论文研究了大豆凝集素的检测、纯化及其对大鼠的抗营养机理,共包括四个部分.首先,通过自制兔抗大豆凝集素抗体,建立了大豆凝集素的间接抑制ELISA测定方法,并对几种不同品种生大豆中的凝集素含量进行了测定.其次,比较了N-乙酰基-D-半乳糖胺-expoxy-Sepharose 6B亲和层析体系和半乳糖胺-CH-Sepharose 4B亲和层析体系制备的大豆凝集素纯度和凝集活性,并采用前者进行大豆凝集素的制备.接着,在上述工作的基础上,设计两个氮平衡试验来研究大豆凝集素对大鼠氮代谢的影响.两个试验均选取24只19日龄断奶的Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分配到四个日粮处理中.采用玉米淀粉+酪蛋白基础日粮,采食量7g/只/d,试验期均为10d.在第一个氮平衡试验中,试验大鼠初始体重73.5±1.8g.四个处理日粮中大豆凝集素水平分别为0、0.1、0.2或0.4mg/g.第二个氮平衡试验是在第一个试验的基础上,提高了日粮中大豆凝集素的含量,分别为0、0.4、0.6或0.8mg/g,试验大鼠初始体重81.5±2.5g.最后,在氮平衡试验的基础上,通过加大凝集素剂量和延长试验期,研究了大豆凝集素对大鼠生长、器官增生以及血浆胰岛素和胆囊收缩素水平的影响.试验选用30只19日龄断奶的Sprague-Dawley(SD)大鼠,初始体重74.5±2.3g,随机分为5个处理,试验期20d.5个处理分别饲喂玉米淀粉+酪蛋白基础日粮(对照),或每g基础日粮分别添加0.4,0.8,1.2或2.0mg的纯化大豆凝集素,采食量7g/只/d.该研究建立的间接抑制ELISA方法检测大豆制品中的凝集素含量时检测下限低于10ng/mL提取液,可以用于检测生大豆及其加工产品中的凝集素含量.采用N-乙酰基-D-半乳糖胺-expoxy-Sepharose 6B亲和层析体系制备的大豆凝集素在纯度、凝集活性等方面都高于半乳糖胺-CH-Sepharose 4B亲和层析体系制备的大豆凝集素.日粮中添加大豆凝集素使大鼠粪氮和尿氮的排出增加(P<0.05),氮表观消化率和氮存留率降低(P<0.05).日粮中添加低剂量(0~0.4mg/g)大豆凝集素对大鼠生长、胰腺和空肠重量没有明显影响.但大鼠体增重和屠体干重随着日粮大豆凝集素水平升高而线性降低(P<0.05),当日粮凝集素水平为2.0mg/g时,显著低于对照组大鼠(P<0.05).血浆胰岛素和胆囊收缩素水平分别随着凝集素水平增加而降低或升高(P<0.05).大豆凝集素诱发多胺依赖的小肠和胰腺的增生,并伴随着蛋白质、RNA和DNA含量的增加(P<0.05).日粮中大豆凝集素水平为2.0mg/g时,大鼠胰腺干重量显著增加,蛋白质、RNA和DNA含量也显著高于对照(P<0.05);小肠绒毛高度降低(P<0.05),腺窝加深(P<0.05),腺窝细胞数增加(P<0.05),表明小肠发生了实质性增生.该论文的研究证明,大豆凝集素对大鼠的氮代谢有明显的副作用,对大鼠生长性能、血浆胰岛素和胆囊收缩素水平及小肠和胰腺增生的影响随剂量提高而增强.
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