蒲公英主要活性成分的提取富集及初步活性评估

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本论文建立了快速且有效的测定蒲公英叶中四种目标活性成分即绿原酸、异绿原酸、菊苣酸和木犀草素的HPLC色谱分析法,利用低共熔溶剂超声辅助方法对蒲公英进行提取,再利用大孔吸附树脂对蒲公英提取物进行富集,并对其进行抗菌、抗氧化与抗炎活性的检测,最后将蒲公英提取物制成喷膜剂并对其进行抗菌研究。主要研究结论如下:1.建立了同时检测蒲公英中绿原酸、异绿原酸、菊苣酸和木犀草素的HPLC色谱分析法:色谱柱:CuroSil-PFP 5u 反相柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5 μm,KYA);流动相:0.1%(v/v)的甲酸水溶液(A)和乙腈(B);柱温为30℃;进样量:20 μL;流速:1 mL/min;检测波长为254 nm;梯度洗脱条件:0-7 min,95-90%(A);7-25 min,90-75%(A);25-30 min,75-70%(A);30-37 min,70-60%(A);37-40 min,60-40%(A)。绿原酸、异绿原酸、菊苣酸和木犀草素在检测范围内的线性关系、重复性、精密度、稳定性与加样回收率均符合实验要求。2.对超声辅助低共熔溶剂提取蒲公英中四种活性成分的工艺参数进行了单因素与BDD实验优化,包括:低共熔溶剂的种类与配比、低共熔溶剂的含水量、提取温度、提取时间和液料比,通过实验测定对蒲公英中的绿原酸、异绿原酸、菊苣酸和木犀草素提取率的影响,确定了最佳提取工艺参数:低共熔溶剂:氯化胆碱:乙二醇=1:1(摩尔比,含水量20%)提取温度:29℃提取时间:38 min液料比:18mL/g分别得到提取率:绿原酸为2.792 mg/g,异绿原酸为0.647 mg/g,菊苣酸为9.824 mg/g,木樨草素为0.281 mg/g。并且筛选出了最优的大孔吸附树脂即D101型树脂,用于蒲公英提取物的富集,绿原酸、异绿原酸、菊苣酸以及木犀草素的回收率分别为78.23%、75.69%、84.15%和73.42%,富集含量分别为 5.74%、3.54%、9.87%和 2.72%。3.对富集后的蒲公英提取物进行体外抗菌、抗氧化和抗炎活性研究。首先测定蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和大肠杆菌的抗菌效果,蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌和白色念球菌的抑菌圈直径分别为6.7 mm和7.1 mm,蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌和白色念球菌的MIC值分别为34.3075 mg/mL和68.615 mg/mL,蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌和白色念球菌的MBC值分别为137.23 mg/mL和137.23 mg/mL,对大肠杆菌未检测出明显抗菌效果;再测定蒲公英提取物的DPPH清除自由基能力,蒲公英提取物的IC50值为0.661 mg/mL,证明蒲公英提取物具有抗氧化活性;最后通过测定一氧化氮在LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞中的抗炎作用,测定了蒲公英提取物对RAW 264.7巨噬细胞的抗炎作用,蒲公英提取物在12.5-50 ng/mL浓度下能有效抑制一氧化氮的分泌,具有抗炎效果。最后将蒲公英提取物制成喷雾成膜剂产品,并对其抗菌效果进行评估,在40 min时能完全杀死白色念珠菌,在60 min时能完全杀死金黄色葡萄球菌,60 min内对大肠杆菌起到不明显的抑制作用。本论文利用超声辅助低共熔溶剂提取对蒲公英中的活性成分进行提取,可有效的提高产率、降低成本并且保证绿色无污染,富集蒲公英提取物后,初步开发了天然绿色蒲公英提取物喷膜剂产品,对合理开发蒲公英资源提供了一定的应用基础。
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