人血管抑素(K1-3)在家蚕细胞和幼虫中的表达及其生物活性研究

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在该实验中我们用家蚕杆状病毒表达系统表达了人血管抑素(K1-3),并研究了其对内皮细胞凋亡和鸡胚新生血管生长的影响,阐明了其与内皮抑素的协同作用.该研究首先将人血管抑素(angiostatin)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBacPAK-angiostatin,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞株,获得重组病毒BacPAK-angiostatin.PCR和DNA点杂交结果表明重组病毒基因组中含有血管抑素基因.该实验还探讨了人血管抑素可能的作用机理和人血管抑素、人内皮抑素以及两者的协同作用对体外培养的内皮细胞的增殖和对体内鸡胚新生血管形成的影响,并将三者的作用效果进行了比较.分别以人血管抑素、内皮抑素和等量的两者的混合物加入到人脐静脉内皮细胞中继续培养36小时,用透射电镜法观察细胞形态的变化,发现三者都能诱导内皮细胞发生典型的凋亡现象,以凋亡率排序依次为:(人血管抑素+内皮抑素)>人血管抑素>人内皮抑素.同样,分别以三者进行鸡胚尿囊膜(CAM)实验,发现三者都能明显抑制新生血管形成,而以两者的协同作用效果最佳.综上所述,运用家蚕杆状病毒表达系统进行表达,可获得大量有生物活性的血管抑素,以满足在临床上大剂量应用,且大幅度降低成本,为今后在临床上的广泛应用打下基础.
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