本研究旨在探讨新生隐球菌各变种、各血清型的系统遗传发育关系；探讨中枢神经系统隐球菌感染、中枢神经系统外隐球菌感染，主要是皮肤和肺部感染的诊断与治疗；本研究最后部分还对白念珠菌的钙调蛋白CMD1基因进行插入失活研究，为研究CMD1基因在白念珠菌由酵母态向菌丝态的转换过程的作用打下基础。主要工作包括以下四个部分： 一、新生隐球菌28S rDNA的基因型特征与序列分析 目的：探讨新生隐球菌各变种、血清型与基因型的关系。方法：新生隐球菌标准株21株、新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10、以及临床分离株19株，采用变性胶梯度电泳(DGGE)结合DNA序列分析，对以上菌株的28S rDNA片段进行研究。结果：经过DGGE和DNA序列分析，所有新生隐球菌新生变种(A、D型)具有一致的基因带型和序列，格特变种(B、C型)具有不同于新生变种的独特一致的带型和序列；AD型的基因型和序列与格特变种完全相同，新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10(D型)的基因型类同于新生变种；19株临床分离菌在DGGE上可分为2型，17株与A、D型完全相同，2株与B、C型相同。结论：DGGE结合DNA序列分析，对于探讨新生隐球菌各变种、血清型的基因型特征、关系具有重要价值；本研究提示，我国非艾滋病隐球菌病感染以新生变种为主，AD型在系统发育上更类同于格特变种，而不是新生变种;本研究不支持A血清型为新生变种以外的新变种即g卫bii变种的观点。二、隐球菌性脑膜炎治疗方法比较的回顾性研究目的:探讨不同方法对于隐球菌性脑膜炎病人的疗效。方法:53例隐球菌性脑膜炎病人，根据所采用的治疗分为三组:I组全程采用两性霉素B静脉滴注单用或合并氟胞嗜陡抗真菌治疗;n组全程采用氟康哇单用或合并氟胞嗜睫抗真菌治疗;111组采用分期治疗，即前期治疗采用两性霉素B静脉滴注与鞘内注射同时应用，后期治疗应用氟康哇或伊曲康哇口服维持。结果:I组8例患者，5例(62.5%)痊愈，2例好转(25%)，死亡1例(12.5%)，1例复发(l 2.5%)。11组5例患者，痊愈与死亡各2例，好转1例，无复发。m组40例患者，39例痊愈，例好转，无复发。I组与n组之间疗效无显著差异(P>0.05)，而111组与I组(P<0.005)及11组(P<0.001)之间疗效存在非常显著差异。结论:分期治疗能明显提高隐球菌性脑膜炎救治的成功率，减少复发率。三、皮肤、肺隐球菌感染的临床资料分析目的:探讨中枢神经系统以外的隐球菌感染的诊断与治疗方法。方法:对1986一2001年间上海长征医院住院的58例隐球菌病中的肺隐球菌病和皮肤隐球菌病的临床资料进行分析。结果:肺部感染103%(6/58)，其中4例合并中枢神经系统隐球菌感染，2例为原发性肺隐球菌病，所有6例患者全部表现为肺部新生物，3例因怀疑肺部肿瘤在外院行切除术;皮肤隐球菌感染3.4%(2/58)，其中1例合并中枢神经系统隐球菌感染，临床重要特征是大小不一的传染性软庆样丘疹。经过治疗2例皮肤隐球菌病好转，6例肺隐球菌病中5例接受治疗痊愈。结论:对于皮肤、肺部隐球菌病，一旦确诊，即使当时未出现中枢感染的症状，也必须进行脑脊液的常规检查，并进行随访，以确定有无中枢神经系统隐球菌感染的发生，并进行疗程足够长的抗真菌治疗。四、白念珠菌钙调蛋白基因Ch厦Dl插入破坏重组基因构建 目的:通过在白念珠菌钙调蛋白基因CMDI中央插入整个〔筋叼3基因的开读框架及附近序列，构建携带选择标记乙天火3基因的白念珠菌钙调蛋白基因CMDI插入破坏重组基因。方法:分两段用PCR法克隆白念珠菌CMI)1基因作为同源重组片段，两段长度分别为9 11bP和49lbP;以携带白念珠菌切侧3结构和调控基因的pSMs44质粒为载体，在动伙了两端分别连接gllP和49lbP片段，构建白念珠菌钙调蛋白基因CMDI中央插入胡以了基因的重组体，测序证实。结果:成功克隆白念珠菌钙调蛋白基因CMDI片段，构建了白念珠菌钙调蛋白基因CMDI中央插入乙仄注3基因的重组体。结论:白念珠菌钙调蛋白基因CMDI插入选择标记U天通3重组基因的获得，是研究钙调蛋白基因在白念珠菌致病中的作用的必要基础。