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目的:肾癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,占成人恶性肿瘤的2~3%,其中肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,cc RCC)约占70%。RCC患者起病隐匿,确诊时20%~30%的患者已有远处转移。RCC的发生、发展是一个多因素、多阶段和多基因参与的生物学过程,但临床上对其发生、发展一直缺乏有效的检测与治疗方法。SET8是现今发现唯一能够特异性单甲基化组蛋白H4赖氨酸20位(Histone H4 lysine20,H4K20)的赖氨酸甲基转移酶,参与调控细胞周期、染色质结构及基因转录。近年来,其在肿瘤发生和发展中所起的作用备受关注。SET8在多种肿瘤组织中表达上调,并参与调控肿瘤相关基因的表达,临床研究发现SET8表达水平影响肝癌、非小细胞肺癌患者的预后,提示SET8在肿瘤发生及侵袭、转移中发挥重要作用,但目前对于SET8基因及其蛋白表达在cc RCC发生、发展中的作用尚不清楚,因此本研究旨在探讨SET8表达水平与cc RCC患者临床病理特征的关系,通过体外细胞学实验明确SET8对cc RCC 786-O细胞增殖转移的影响及其可能机制。方法:1、免疫组织化学法检测cc RCC组织标本SET8蛋白表达情况及其与cc RCC患者临床病理特征的关系。2、体外培养cc RCC 786-O细胞,针对人SET8基因设计合成4对候选短发夹RNA(sh RNA)序列(sh RNA1,sh RNA2,sh RNA3,sh RNA4),以lipofectamine 2000为载体,转染cc RCC 786-O细胞,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测786-O细胞SET8蛋白的表达,筛选有效sh RNA序列。将有效sh RNA序列转染786-O细胞,细胞分3组:(1)SET8-sh RNA转染组(转染SET8-sh RNA);(2)阴性对照转染组(转染阴性对照sh RNA);(3)正常对照组(未转染组)。3、MTT法检测786-O细胞增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测786-O细胞迁移能力;Transwell小室实验检测786-O细胞侵袭能力。4、RT-PCR检测各组细胞wnt通路相关基因β-catenin、c-myc、MMP7m RNA表达情况。5、统计学方法应用SPSS 21.0统计学软件进行统计学处理,计量资料以(sx±)表示,SET8蛋白表达水平与cc RCC患者临床病理特征的关系采用χ2检验,两组间均数比较采用t检验,多组间均数比较采用方差分析。P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1 SET8蛋白表达与cc RCC患者临床病理特征的关系:156例cc RCC组织中,SET8蛋白阳性表达154例,占98.7%(154/156);SET8蛋白高表达者94例,占60.3%(94/156),低表达者为62例,占39.7%(62/156)。SET8蛋白表达与肿瘤分期、肿瘤大小及淋巴结转移关系密切(均P<0.05),但与cc RCC患者的性别、年龄无统计学差异(均P>0.05);2 RNA干扰技术沉默SET8在786-O细胞中的表达:在SET8-sh RNA浓度为2ug/L、lipofectamine 2000为4ul/孔转染条件下,转染效率约70%;筛选最佳干扰序列为SET8-sh RNA2,转染48h沉默效率可达64%。SET8-sh RNA2转染组SET8蛋白表达在转染后48h显著低于阴性对照转染组、正常对照组(t=-38.174,P<0.01;t=-58.766,P<0.01);3 SET8基因沉默抑制786-O细胞增殖和克隆形成能力:MTT结果显示:与阴性对照转染组和正常对照组相比,SET8-sh RNA2转染组MTT吸光度值在转染后24、48h明显下降(均P<0.05)。SET8-sh RNA组的克隆形成数目显著低于阴性对照转染组和正常对照组(均P<0.05),且克隆体积亦较小,而后两组比较无统计学意义(P>0.05);4 SET8基因沉默抑制786-O细胞迁移侵袭能力:沉默SET8基因后cc RCC细胞划痕愈合速度明显慢于阴性对照转染组和正常对照组(均P<0.05),SET8-sh RNA组细胞迁移抑制率为66.7%,癌细胞迁移率明显减低。Transwell小室实验结果显示,与阴性对照转染组、正常对照组相比,SET8基因沉默后786-O细胞侵袭细胞数明显降低(P<0.05);5 SET8基因沉默抑制wnt信号通路相关基因c-myc、MMP7 m RNA的表达:与阴性对照转染组、正常对照组相比,沉默SET8基因表达后,wnt靶基因c-myc、MMP7 m RNA表达明显下调(P<0.05),而β-catenin m RNA表达水平未受影响(P>0.05)。结论:1 SET8蛋白在cc RCC组织中高表达,并且与肿瘤分期、肿瘤大小及淋巴结转移关系密切。2 SET8基因沉默抑制cc RCC 786-O细胞增殖、克隆形成及迁移侵袭能力。其机制之一可能是通过抑制c-myc、MMP7 m RNA表达发挥作用。SET8有望成为肾癌基因治疗的有效靶点。