CD146、HIF-1α和铁蛋白在c-Kit(+)卵巢癌细胞的表达及意义

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卵巢癌在全球妇科恶性肿瘤中比较常见,发病率及死亡率居于前列。卵巢癌在病理上分类较多,上皮性癌最常见,约占卵巢恶性肿瘤的70%。手术是主要的治疗方式,其次是辅助化疗。虽然经过标准化的治疗,但是大多数晚期患者仍会复发,最终导致死亡,原因之一是化疗耐药的出现,尤其是对铂类药物的耐药,难治性或者耐药性患者的治疗仍然是一大挑战。识别与肿瘤生物学相关的预后因素可能会改善患者的预后,为卵巢癌的治疗带来新的策略。有研究表明,c-Kit与上皮性卵巢癌的进展关系密切,卵巢癌铂类化疗产生耐药亦与c-Kit蛋白的阳性表达高度相关。为了开发新的、更有效的抗癌策略,鉴定对肿瘤发生至关重要的转录因子活性产物将是非常重要的。其中一个是缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),它是一种在低氧条件下诱导的转录因子,在卵巢癌组织中的过表达与治疗失败和死亡率有关。HIF-1活性增强促进肿瘤进展,抑制HIF-1可能成为卵巢癌治疗的新途径。近年来发现一种黑色素瘤细胞黏附分子CD146,与化疗耐药的风险显著相关,是卵巢癌早期复发和预后较差的标志。实验证实,沉默铁蛋白重链基因后,可以逆转癌细胞对铂类药物的耐药性。铁代谢相关指标如铁蛋白等可能与卵巢癌的发生发展相关,干预或检测铁代谢相关指标可能改善卵巢癌预后。虽然己有研究表明c-Kit、CD146、HIF-1α及铁蛋白重链、轻链在人卵巢癌中有表达,然而关于上述分子在卵巢癌铂耐药患者的表达及与卵巢癌肿瘤进展和预后的相关研究很少,其对疾病进展及预后的具体机制也有待进一步研究。目的:顺铂作用卵巢癌SKOV3及SKOV3/DDP细胞,检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡以及c-Kit、HIF-1α、CD146及铁蛋白的蛋白表达情况,探讨上述分子在卵巢癌SKOV3细胞系顺铂耐药中的作用,为临床上治疗卵巢癌提供一种新的策略。方法:分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术和蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测顺铂作用SKOV3及SKOV3/DDP细胞的增殖及凋亡情况,检测c-Kit、CD146、HIF-1α及铁蛋白重链、轻链的蛋白表达情况。使用SPSS25.0统计软件处理所得实验数据,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1、在光学显微镜下观察,顺铂能够促使SKOV3及SKOV3/DDP细胞形态改变,促进细胞凋亡。2、MTT法。顺铂刺激可显著抑制SKOV3细胞活力,相比之下,SKOV3/DDP细胞的细胞活力下降较低,且随着处理浓度及时间的增加其增殖抑制更明显,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。3、流式细胞术。顺铂能够促进SKOV3及SKOV3/DDP细胞凋亡率升高,两者结果具有显著性差异(P<0.05),且干预效果与顺铂浓度相关。4、Western Blot。SKOV3 及 SKOV3/DDP 细胞 c-Kit、CD146、HIF-1α及铁蛋白蛋白表达明显不同,SKOV3/DDP细胞上述蛋白表达水平较高;顺铂作用SKOV3及SKOV3/DDP细胞,c-Kit、CD146、HIF-1α蛋白表达呈增长趋势,而SKOV3/DDP细胞蛋白增加更为显著,且与顺铂作用浓度及时间明显相关。结论:1、顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞在不同时间和不同浓度下的增殖具有抑制作用,呈剂量-效应关系,而且能够促进细胞凋亡。2、c-Kit、CD146、HIF-1α、FHC和FLC蛋白表达量高于铂敏感细胞,且随铂类化疗而有升高的趋势;卵巢癌c-Kit(+)细胞CD146和HIF-1α蛋白表达量高于c-Kit(-)细胞。
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