发酵桦褐孔菌对肝癌Hepg-2细胞凋亡作用初探

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目的:初步探讨发酵桦褐孔菌对肝癌HepG-2细胞的凋亡作用。  方法:分别采用硫酸苯酚法、Folin-Ciocalteu法、比色法测定未发酵、发酵桦褐孔多糖、萜类和多酚的含量;以肝癌HepG-2细胞为实验对象,采用MTT法测定发酵桦褐孔菌对肝癌HepG-2细胞增殖的影响;HE染色法观察发酵桦褐孔菌对肝癌HepG-2细胞形态学的影响;流式细胞仪测定发酵桦褐孔菌对肝癌HepG-2细胞凋亡作用及细胞周期的影响;琼脂糖凝胶电泳法观察发酵桦褐孔菌对肝癌HepG-2细胞DNA裂解的影响。  结果:与未发酵桦褐孔菌比较,发酵桦褐孔菌多糖、多酚和萜类含量明显升高(P<0.01);发酵桦褐孔菌显著抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其抑制作用与给药时间和给药浓度呈正相关,且与未发酵桦褐孔菌相比,发酵桦褐孔菌浓度为100mg/L,处理时间为48h对肝癌细胞的抑制作用更明显(P<0.05),且呈时间与剂量依赖性;与对照组比较,发酵桦褐孔菌组肝癌HepG-2细胞细胞间距增大、细胞核固缩、染色加深、细胞膜皱缩、形成凋亡小体,出现典型凋亡形态,凋亡程度随着剂量和时间的增加而增强,与未发酵组相比,肉眼观察无差异;发酵桦褐孔菌可显著诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,并且随着浓度的增加其诱导凋亡作用增强,与未发酵桦褐孔菌相比,当发酵桦褐孔菌浓度为200mg/L、400mg/L,诱导肝癌细胞凋亡作用更显著(P<0.01);与对照组相比,发酵桦褐孔菌组肝癌HepG-2细胞细胞周期分布受到影响, G0/G1期细胞比率显著升高(P<0.05),S期和G2/M期比率显著下降(P<0.05),与未发酵桦褐孔菌组相比,发酵桦褐孔菌浓度为200mg/L,作用时间为48h时G0/G1期细胞周期分布存在显著性差异(P<0.05);与对照组相比,发酵桦褐孔菌作用48h肝癌HepG-2细胞DNA均发生裂解,呈现典型的梯形凋亡形态,与未发酵桦褐孔菌相比,发酵桦褐孔菌DNA裂解更明显。  结论:发酵桦褐孔菌可显著诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,且与未发酵桦褐孔菌相比,发酵桦褐孔菌更显著诱导肝癌HepG-2细胞凋亡。
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