论文部分内容阅读
目的:通过16S rDNA测序探究睑板腺功能障碍患者与健康人眼表菌群的组成和多样性差异。方法:(1)将47名睑板腺功能障碍患者按照临床症状、体征和睑板腺分泌物质量评分分为轻度、中度和重度睑板腺功能障碍组,同时纳入42名性别和年龄匹配的健康受试者作为健康对照组。(2)随机选取受试者的一只眼睛,通过无菌拭子擦拭上、下结膜囊和眼睑完成样本的采集。(3)对结膜囊样本进行DNA提取,PCR扩增,DNA文库的扩建,测序获得16S rDNA基因的(V3-V4)可变区,比较各组间在分类学和多样性上的差异。(4)使用Mann-Whitney U比较各组间Alpha多样性指数和各组间的优势菌种的相对丰度。采用Spearman相关性分析,测定睑板腺功能障碍患者睑板腺萎缩程度与葡萄球菌相对丰度的相关性。结果:(1)将47名睑板腺功能障碍患者与42名正常受试者结膜囊标本建库进行下游的16S rDNA分析。89例样本经质控合格后共获得1,596,000个原始tags。(2)各组间Alpha多样性指数均无显著差异(P>0.05,Mann-Whitney U)。(3)在门水平上,睑板腺功能障碍患者结膜囊中优势菌门为放线菌门(Actinobacteria)(34.17%,1.26%～87.11%)、厚壁菌门(Firmicutes)(31.70%,3.34%～90.66%)、变形菌门(Proteobacteria)(27.46%,2.30%～84.48%)、拟杆菌门(Bacteroidetes)(2.21%,0.02%～10.54%)、异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)(1.19%,0%～8.96%)。其中,厚壁菌门(Firmicutes)(31.70%vs.19.67%)和变形菌门(Proteobacteria)(27.46%vs.14.66%)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05,Mann-Whitney U),而放线菌门(Actinobacteria)(34.17%vs.56.98%)的相对丰度显著低于对照组(P<0.05,MannWhitney U)。在属水平上,睑板腺功能障碍患者结膜囊中的优势菌属为葡萄球菌属(Staphylococcus)(20.71%、0.20%～88.40%),棒状杆菌属(Corynebacterium)(20.22%、0.09%～85.20%),丙酸菌属(Propionibacterium)(9.29%、0.05%～59.64%),鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)(5.73%、0.36%～22.75%),Snodgrassella属(4.17%、0%～68.12%),和链球菌属(Streptococcus)(2.80%、0%～22.28%)。其中睑板腺功能障碍患者眼表葡萄球菌属(Staphylococcus)(20.71%vs.7.88%)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)(5.73%vs.0.79%)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05,MannWhitney U),而棒状杆菌属(Corynebacterium)的相对丰度(20.22%vs.46.23%)显著低于对照组(P<0.05,Mann-Whitney U)。LEf Se分析显示在门水平,睑板腺功能障碍组的显著微生物为变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)而对照组为放线菌门(Actinobacteria)。在属水平,睑板腺功能障碍组以葡萄球菌属(Staphylococcus)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)为显著微生物,对照组以棒状杆菌属(Corynebacterium)为显著微生物。(4)在属水平上,对照组和轻度睑板腺功能障碍组棒状杆菌属(Corynebacterium)的相对丰度显著高于中度睑板腺功能障碍组和重度睑板腺功能障碍组(P<0.05,Mann-Whitney U)。同时,重度睑板腺功能障碍组葡萄球菌属(Staphylococcus)的相对丰度明显高于其他各组(P<0.05,Mann-Whitney U)。各组样本间主坐标分析显示,重度睑板腺功能障碍组与其他各组样本分布分离显著。(5)睑板腺功能障碍患者眼表葡萄球菌属的相对丰度与其睑板腺萎缩程度呈正相关(r=0.650,P<0.001,Spearman)。结论:睑板腺功能障碍患者结膜囊内可出现不同程度的细菌菌群失衡,葡萄球菌属(Staphylococcus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)在睑板腺功能障碍患者眼表的相对丰度与健康人存在差异。