皮肤创伤愈合是一种复杂的病理性组织再生过程,涉及一系列相互影响相互重叠的反应,其中包括首发的炎症反应、肉芽组织的形成、细胞外基质的产生以及新生组织的塑形。在皮肤创伤愈合过程中的每一步反应阶段都离不开真皮成纤维细胞的参与,成纤维细胞通过细胞的增殖、细胞外基质的合成和细胞迁移、粘附活动等方式帮助创伤愈合的完成,所以人真皮成纤维细胞在皮肤创伤愈合过程中有着不可替代的作用。国内外研究证实神经鞘氨醇磷酸胆碱(sphingosylphosphorylcholine, SPC)可促进皮肤创伤愈合。这可能与SPC具有促进多种参与皮肤创伤愈合相关细胞增殖水平的作用有关(如表皮角质形成细胞、真皮成纤维细胞、皮脂腺细胞、毛囊细胞及血管内皮细胞),以及促进血管再生、细胞迁移粘附、细胞骨架再生及其相关蛋白的表达有关。SPC可能通过与细胞膜表面受体特异性结合,作为第二信使激活信号传导途径,调节细胞因子活性,尽而发挥一系列生物学作用,参与皮肤的创伤愈合。但SPC促进皮肤创伤愈合过程中细胞生理状态和蛋白类物质表达的变化方面,进而涉及到具体机制方面还有待于进一步研究。皮肤创伤愈合过程中的组织重塑依赖于在基质金属蛋白酶(matrix matalloproteinase, MMPs)的作用下细胞外基质的重建过程,其中在一定的时期也受到基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMPs)的调控。MMPs/TIMPs体系的变化调节细胞外基质的沉积和降解之间的平衡。TIMPs通过结合MMPs,抑制其活性,进而影响正常细胞以及肿瘤细胞的增殖、迁移,特别是在创伤愈合过程中发挥着不可替代的作用。因此通过观察TIMP-1的表达变化可从一个方面猜想皮肤创伤愈合的效率。目的：研究神经鞘氨醇磷酸胆碱在体外培养人真皮成纤维细胞的增殖作用以及对创伤愈合相关蛋白TIMP-1表达的影响。探讨SPC发挥生物学作用的又一途径,进一步证实SPC促皮肤创伤愈合的作用。方法：取3个个体包皮环切术的包皮组织为组织来源,原代培养人真皮成纤维细胞,传代培养12代以内的单层成纤维细胞为研究对象。在体外细胞培养条件下,通过MTT方法检测SPC的浓度梯度(0.1,1,5,10,20μM)干预人真皮成纤维细胞增殖能力的影响。半定量RT-PCR检测各组人真皮成纤维细胞TIMP-1mRNA表达情况变化。Western blotting免疫印迹法鉴定人真皮成纤维细胞在SPC干预下TIMP-1蛋白表达水平的变化。结果：不同浓度的SPC对人真皮成纤维细胞增殖具有不同程度的促进作用,5μM组和10μM组增殖促进现象较对照组明显,且SPC促人真皮成纤维细胞的增殖情况存在对SPC的浓度依赖性,5μM组和10μM组增殖促进现象较对照组明显,SPC干预浓度与成纤维细胞增殖情况呈相关性(P<0.05)。RT-PCR结果显示5μM的SPC具有上调成纤维细胞TIMP-1 mRNA的表达作用,当SPC浓度达到20μM时,TIMP-1 mRNA的表达产生抑制作用,检测物OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.768±0.339、5μM组为1.062±0.961、20μM组为0.490±0.138,P<0.05,表示差异有统计学意义。5μM的SPC以时间梯度(2、6、12、24和48小时)干预成纤维细胞后,TIMP-1 mRNA的表达水平产生了不同程度的变化,各组与无药物对照组相比6小时组、12小时组、24小时组TIMP-1 mRNA表达增强,OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.357±0.636,6小时组为0.888±0.162,12小时组为0.761±0.156,24小时组为0.736±0.063,P<0.05,表示差异有统计学意义。SPC作用下TIMP-1 mRNA的表达水平增强呈现时间依赖性,OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.357±0.636,6小时组为0.888±0.162,12小时组为0.761±0.156,24小时组为0.736±0.063,P<0.05,表示差异有统计学意义。依此可认为受SPC诱导的TIMP-1 mRNA表达的最佳作用时间为12小时左右。免疫印记实验显示SPC促进TIMP一1蛋白的表达,并同样呈现时间的依赖性。6小时组和12小时组P<0.05,24小时组与48小时组P<0.01,均表示差异有统计学意义。结论：1.SPC可促进人真皮成纤维细胞的增殖,且增殖情况与SPC浓度呈相关性。2.SPC具有调节人真皮成纤维细胞TIMP-1的表达作用,并以此参与调控皮肤的创伤愈合过程。