随着现代分子生物学技术的不断发展,有关昆虫病原真菌致病机理的研究越来越深入。蝗绿僵菌是目前研究比较广的一类昆虫病原真菌,可以作为研究昆虫病原真菌的模式生物。几丁质是真菌细胞壁的重要组成部分,几丁质合成的关键酶是几丁质合酶(CHS)。在丝状真菌中,几丁质合成酶家族基因分为七类。目前,有关昆虫病原真菌几丁质合成酶家族基因的研究还未见报道。所以本研究以昆虫病原真菌蝗绿僵菌为研究对象,研究蝗绿僵菌几丁质合成酶家族基因Ma Chs,阐明Ma Chs家族各基因在蝗绿僵菌抗逆和侵染致病过程中的作用。本研究的主要研究结果如下:①蝗绿僵菌Ma Chs家族有七个基因,分别命名为Ma Chs I、Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V、Ma Chs VI、Ma Chs VII。②通过q RT-PCR测定Ma Chs家族各基因在侵染过程中的表达量。除5天虫菌体中Ma Chs VII表达量最高,其余各时期均是Ma Chs III相对表达量最高,Ma Chs VI在各时期相对表达量最低;比较同一基因在不同时期的表达量,Ma Chs II在附着胞时期相对表达量最高,其他各基因均在孢子时期相对表达量最高。③在1/4SDAY固体培养基加入各种逆境,ΔMa Chs III、ΔMa Chs V在CR、CFW和H2O2条件下,长势弱于野生型,ΔMa Chs VII在CR、CFW、H2O2、SDS、SOR、Na Cl逆境及1/4SDAY空白对照中长势均弱于野生型,其他敲除菌株在逆境下与野生型没有差异。敲除Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V和Ma Chs VI影响蝗绿僵菌对湿热的敏感性,敲除Ma Chs II、Ma Chs IV、Ma Chs VI影响蝗绿僵菌对紫外的敏感性,ΔMa Chs I对紫外湿热的敏感性与野生型无差异。④分析Ma Chs家族各基因对蝗绿僵菌产孢量和萌发的影响。结果显示,除ΔMa Chs I外,其他敲除菌株产孢量均比野生型低,其中ΔMa Chs VII产孢量急剧降低。统计萌发率显示ΔMa Chs I、ΔMa Chs IV萌发中时延迟;ΔMa Chs II、ΔMa Chs III、ΔMa Chs V萌发中时提前,ΔMa Chs VI萌发中时与野生型相比没有显著差异。⑤通过点滴和注射分析各基因敲除后对蝗绿僵菌毒力的影响。结果显示ΔMa Chs III点滴和注射接种蝗虫,毒力均降低。研究发现,ΔMa Chs V注射毒力升高,ΔMa Chs VII注射毒力丧失,其余各基因对蝗绿僵菌毒力没有影响。⑥通过透射电镜观察Ma Chs家族各基因敲除后对蝗绿僵菌细胞壁的影响,结果显示敲除菌株细胞壁与野生型有一定的差异,敲除菌株细胞壁变厚。