根用芥菜(Brassica juncea var. megarrhiza Tsen et Lee)又名大头菜,是十字花科芸薹属作物、芥菜的一个变种,以其膨大的肉质根为产品器官。我国大头菜育种相对比较落后,生产上的主栽品种为自留种。在常规育种中选育一个纯合的自交系一般需要5-8年,而运用花药培养或游离小孢子培养可以在1-2年获得纯合的双单倍体植株,加快育种进程。本研究以根用芥菜的著名地方品种——狮子头芥菜为试验材料,分别采用花药培养和游离小孢子培养两种不同的培养方法进行试验。试验研究了影响小孢子胚胎发生的几个主要因素,对胚状体的再生和再生植株的驯化移栽也进行了研究,同时还通过多种方式对再生植株进行了倍性鉴定。通过本研究旨在获得完善的大头菜花药培养和游离小孢子培养技术。本试验主要的研究结果如下：1.本试验将花蕾的长度划分为六个等级：2.0mm以下、2.0-2.5mm、2.5-3.0mm、3.0-3.5mm、3.5-4.0mm和4.0mm以上,经显微观察当花蕾长度在2.0-2.5mm时,小孢子处于单核靠边期的比例最高,最适合进行单倍体培养。2.MS、B5和改良的Keller 3种培养基对花药培养出胚率的影响研究表明：MS和B5培养基上没有胚状体的形成,改良的Keller上花药培养的出胚率为0.36个/蕾,改良的Keller培养基更适合进行大头菜花药培养。3.4℃处理0d、1d、3d和5d对花药出胚率的影响研究结果显示,4℃条件下花蕾处理5天与处理3天在对胚状体诱导率上存在显著差异,处理5天的诱导率最低；预冷0d、1d、3d三种处理之间在出胚总数和出胚率上存在差异,但是差异不显著,其中低温处理3d的出胚率最高。4.32.5℃热激处理0d、1d、2d对花药出胚率的影响研究结果显示：32.5℃热激处理1d、2d与不进行热激处理之间,在出胚诱导上存在显著差异,热激处理1d和2d之间没有显著差异,但热激处理两天稍好。5.NLN-13液体培养和NLN-13固液双层培养两种培养方式对游离小孢子培养出胚率的影响研究结果显示,这两种培养方式在出胚率上差异不显著。6.预冷处理中,培养基添加甘露醇对游离小孢子培养出胚率影响研究结果显示：固体B5-13+15g/L甘露醇培养基处理花药的出胚率最高,与液体B5-13添加15g/L甘露醇处理花蕾在游离小孢子培养的出胚率上差异显著,但与液体B5-13添加30g/L和45g/L甘露醇的处理没有显著差异。7.6-BA、KT、2,4-D和NAA 4种激素对游离小孢子培养出胚率的研究结果显示：四个因素中对游离小孢子培养出胚率影响的大小依次为NAA、6-BA、2,4-D、KT,不添加激素的处理为最优组合。8.再生植株气孔保卫细胞叶绿体数目鉴定研究结果显示,正常的二倍体植株叶绿体数目观察值为12～18,单倍体的观察值为3-13,二倍体的观察值为12～20。正常的二倍体植株叶绿体数目较集中,叶绿体数目在14～18个5个变幅之间所占的比例为94.1%,再生植株二倍体中保卫细胞叶绿体数目在14～19个6个变幅之间所占的比例为90.1%,单倍体的保卫细胞叶绿体数目的变异幅度最大,保卫细胞叶绿体数目在4～11个8个变幅之间所占的比例为92.4%。9.再生植株流式细胞仪倍性鉴定结果显示,本试验所获得的材料只有单倍体和二倍体,自然加倍率为50%,检测没有发现多倍体和嵌合体。