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细菌DNA具有广谱的免疫刺激作用。在体外可以直接激活B淋巴细胞、单核／巨噬细胞和树突状细胞，上调免疫刺激分子的表达，调节免疫反应，诱导IL-12、IL-1和TNF-α等多种细胞因子的分泌，此外，细菌DNADNA还能间接刺激NK细胞、T淋巴细胞。其根本原因是细菌DNA中含有高比例的、特定的非甲基化CpG基序（CpGmotif），模拟细菌DNA合成的非甲基化的CpG寡核苷酸（CpG ODN）也同样具有免疫刺激作用。因此，细菌CpG DNA作为免疫佐剂的研究日益受到医学与兽医学的广泛重视，但大部分研究局限于实验动物，临床应用研究较少。本研究室曾证明大肠杆菌牦牛株CpG DNA具有免疫刺激作用，本研究在此基础上，进一步探讨大肠杆菌牦牛株CpG DNA对鸡的免疫增强作用，并对生产工艺与产品的技术参数进行了深入研究。 1．以大肠杆菌牦牛株为参考菌株，比较了STET法、SDS-CTAB法及STET-CTAB法三种DNA提取方法。结果显示三种方法得到的细菌DNA均符合试验的要求，均能刺激T淋巴细胞增殖，但三种方法的DNA得率存在差异，以STET-CTAB法得率最高，为3mg／100ml菌液，且产品最纯，A260／A280值为1.95。 2．以细菌DNA作为灭活H9亚型禽流感病毒的疫苗佐剂，免疫接种15日龄试验鸡，测定T、B淋巴细胞增殖反应和血凝抑制抗体水平，通过攻毒试验检测疫苗的免疫保护效果。结果显示细菌DNA可显著提高T、B淋巴细胞增殖反应及特异性抗体水平。细菌DNA疫苗组的攻毒保护率为88.9％，明显高于无佐剂的抗原免疫组（攻毒保护率为30.0％）。 3．大肠杆菌DNA、质粒pUC18和质粒pcDNA3.1中都含有CpG基序，用此三种DNA作为禽流感病毒H9亚型灭活疫苗的佐剂接种试验鸡，比较其免疫增强效果。结果表明，含三种佐剂的免疫鸡血凝抑制抗体的水平、T、B淋巴细胞增殖反应及攻毒保护率均显著高于抗原单独免疫组（p＜0.01），且免疫组均显著高于空白组（p＜0.01）；但各佐剂组T、B淋巴细胞增殖差异不明显（p＞0.05） 4．用不同剂量的细菌DNA作为H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的佐剂接种蛋用小公鸡，检测B淋巴细胞增殖反应，并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示，细菌DNA剂量为25μg／只时，即可显著增免疫反应。随着剂量的增加，细菌DNA的免疫增强作用有所增加，但统计学差异不显著。全文摘要5.用细菌DNA和矿物油分别作为禽流感病毒Hg亚型灭活疫苗的佐剂，接种试验鸡，以比较两种佐剂的免疫增强效果.结果显示，细菌DNA和矿物油均具有明显的免疫增强效应，细菌DNA的免疫增强作用略高，但统计学上无显著差异.由于细菌DNA易于被机体吸收，在接种部位不形成明显病理损害，所以细菌DNA作为佐剂优于矿物油.