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细胞色素P450在药物的生物利用、药物间相互作用,以及在致癌代谢物形成中的作用已成为生命科学领域的研究热点之一,但目前的研究主要集中在人和一些实验室动物中,有关鸡的细胞色素P450对药物等外源性化合物的代谢作用的研究很有限。肝脏是动物体内P450种类与含量最为丰富的组织,传统的体外药物代谢研究使用的是肝微粒体或肝细胞培养,但是肝脏中含有多种结构相似的P450蛋白,分离纯化单一P450蛋白也比较困难。随着分子生物学技术的不断发展与成熟,多种异源表达P450基因的方法在毒理学、药理学和其它研究领域变得不可或缺。
为了对鸡细胞色素P450(CYP1A5、CYP1A4)蛋白进行体外功能研究,本论文采用大肠杆菌表达系统进行CYP1A5、CYP1A4.的异源表达。以鸡的cDNA为模板,扩增出CYP1A5、CYP1A4基因,将该基因的N-端编码区进行修饰,并连接到pCW载体中构建His-CYP1A5、His-CYP1A4,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达。经CO-差示光谱检测,所获得的His-CYP1A5、His-CYP1A4具有典型的P450吸收峰。所获得的CYP1A5蛋白与细胞色素P450还原酶(CPR)进行体外重组,构成的重组酶系表现出乙氧基试卤灵-O-脱乙基酶活性。结果表明本研究所采用的表达策略成功产生出了具有催化活性的鸡细胞色素P450(CYP1A5)蛋白。