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草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp reo virus, GCRV)是由我国分离鉴定的第一株鱼类病毒,也是目前水生呼肠孤病毒属中致病力最强的病毒之一,该病毒不仅感染草鱼,而且还可以感染鲢鱼、布氏鳌条鱼,给水产养殖业带来了严重的经济损失。本研究围绕GCRV诱导细胞凋亡和杆状病毒载体疫苗两个方面展开了以下研究：1. GCRV诱导FHM细胞凋亡的初步研究将GCRV分别感染草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon idellus kidney cell, CIK)和胖头鲤细胞(Fathead minnow cell, FHM),在不同时间点观察细胞病变效应,发现GCRV均可引起这两种细胞病变,但发生病变的细胞在形态上有所不同,GCRV对CIK细胞更为敏感,可以使感染的CIK细胞快速融合并裂解,而被感染的FHM细胞很少有细胞融合,并且细胞不会被裂解：利用DAPI、Annexin V-FITC染色和TUNEL技术进一步证实GCRV能够诱导FHM细胞发生细胞凋亡,但不能诱导CIK细胞发生细胞凋亡。本研究首次发现GCRV可以诱导FHM细胞发生凋亡,并推测GCRV在感染不同类型的细胞时,可以以不同机制促使细胞死亡,从而为进一步研究GCRV的致病机制提供线索。2.表达GCRVVP6蛋白的重组杆状病毒构建及其诱导草鱼免疫反应的评价克隆GCRV VP6基因,并将其插入杆状病毒转移质粒,构建重组转移质粒pFast-CMV-VP6,将其转化至感受态细胞DH10Bac后,经过多次筛选及纯化,获得阳性重组子rBacmid-CMV-VP6;将重组子在脂质体介导下转染昆虫细胞sf9,最后获得重组杆状病毒Bac-CMV-VP6;将重组杆状病毒Bac-CMV-VP6感染sf9、EPC和CIK细胞,通过间接免疫荧光检测,证明VP6蛋白均可以在这三种细胞中进行表达；将该重组杆状病毒免疫10-15cm草鱼,剂量为109PFU/条,并在免疫后第7d、14d、21d采集免疫鱼的肝脏和脾脏,利用荧光定量PCR方法检测IFN-I、IRF-7基因表达情况；同时,在免疫后第28d,采集免疫鱼血清,并利用微量中和试验测定血清中的中和抗体水平,结果表明：该杆状病毒不仅可以增强草鱼IFN-I、IRF-7免疫相关基因的显著表达,而且可以诱导草鱼产生显著的中和抗体,从而为研究基于杆状病毒表达载体的GCRV新型基因工程疫苗奠定了基础。