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白酒是一类含有大量香味物质的饮料，在白酒风味的形成过程中，酯类物质发挥了重要的作用，怎样提高白酒中酯类的含量，是白酒生产者亟待解决的问题。然而，关于产酯酵母产酯机理的研究比较少，通过对低产乙酸乙酯突变株的DNA与出发菌株的DNA进行比对，在基因文库中寻找产酯关联基因，是进一步了解产酯机理的方法。本课题以产酯酵母BTL-Y01为出发菌株，经过复合诱变选育，获得低产乙酸乙酯突变株，并构建产酯酵母基因文库，为进一步探索产酯酵母产乙酸乙酯的代谢机理奠定理论基础。主要研究结果结果如下：
1、产酯酵母的诱变育种。对产酯酵母BTL-Y01进行液体培养，用比浊法测定生长曲线。根据产酯酵母生长曲线得知，该菌株培养8h进入对数生长期。通过致死曲线的制作，得到紫外诱变最佳剂量为100s，化学诱变剂DES最佳剂量为42min。通过紫外诱变得到一低产突变株Y12，对其培养后的发酵液进行气相色谱测定乙酸乙酯的含量，其产乙酸乙酯能力为0.091g/L，较出发菌株BTL-Y01的产乙酸乙酯能力降低了95.8%，再进行化学诱变筛选出低产乙酸乙酯的突变株YB8，该突变株产乙酸乙酯含量为0.013g/L。经遗传稳定性实验证明，YB8突变的遗传稳定较好。
2、产酯酵母DNA文库的构建。将产酯酵母BTL-Y01菌株与带有pPIC9质粒的大肠杆菌GHI菌株进行培养后，采用碱裂解法提取酵母基因组DNA和pPIC9质粒，利用限制性内切酶对BTL-Y01菌株的总基因组和pPIC9质粒经行单酶切，回收7~9kbp的酵母基因组DNA片段，与磷酸化的载体pPIC9进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞，构建DNA文库，经验证，文库大小为2.21×103pfu。
3、产酯酵母cDNA文库的构建。通过SMART（switch mechanism at5′end of mRNAtemplate）技术，利用帽子结构的特征，合成一段寡核苷酸作为CapSwitch，在oligo(dT)引导逆转录后作为PCR扩增5端的引物，合成全长cDNA，后经Trimmer-Direct进行均一化处理，处理后产物经Sfi酶切后与PGADT7-rec-AB载体连接，转化大肠杆菌DH10B。构建的cDNA文库的平均插入片段长度在1000b以上，空载率：0%，滴度：1.0×106cfu/ml，库容在3×106以上，cDNA文库的覆盖率达到74.07%，基本达到建库要求，可以利用此文库进行产酯酵母功能基因的筛选。
1、产酯酵母的诱变育种。对产酯酵母BTL-Y01进行液体培养，用比浊法测定生长曲线。根据产酯酵母生长曲线得知，该菌株培养8h进入对数生长期。通过致死曲线的制作，得到紫外诱变最佳剂量为100s，化学诱变剂DES最佳剂量为42min。通过紫外诱变得到一低产突变株Y12，对其培养后的发酵液进行气相色谱测定乙酸乙酯的含量，其产乙酸乙酯能力为0.091g/L，较出发菌株BTL-Y01的产乙酸乙酯能力降低了95.8%，再进行化学诱变筛选出低产乙酸乙酯的突变株YB8，该突变株产乙酸乙酯含量为0.013g/L。经遗传稳定性实验证明，YB8突变的遗传稳定较好。
2、产酯酵母DNA文库的构建。将产酯酵母BTL-Y01菌株与带有pPIC9质粒的大肠杆菌GHI菌株进行培养后，采用碱裂解法提取酵母基因组DNA和pPIC9质粒，利用限制性内切酶对BTL-Y01菌株的总基因组和pPIC9质粒经行单酶切，回收7~9kbp的酵母基因组DNA片段，与磷酸化的载体pPIC9进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞，构建DNA文库，经验证，文库大小为2.21×103pfu。
3、产酯酵母cDNA文库的构建。通过SMART（switch mechanism at5′end of mRNAtemplate）技术，利用帽子结构的特征，合成一段寡核苷酸作为CapSwitch，在oligo(dT)引导逆转录后作为PCR扩增5端的引物，合成全长cDNA，后经Trimmer-Direct进行均一化处理，处理后产物经Sfi酶切后与PGADT7-rec-AB载体连接，转化大肠杆菌DH10B。构建的cDNA文库的平均插入片段长度在1000b以上，空载率：0%，滴度：1.0×106cfu/ml，库容在3×106以上，cDNA文库的覆盖率达到74.07%，基本达到建库要求，可以利用此文库进行产酯酵母功能基因的筛选。