【摘 要】
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该研究以BaP—HSF1—HSP70为主线,采用Western-blot、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-dimensional polyacrylimade gel electrophoresis,2D-PAGE)、单细胞琼脂糖凝胶电泳(single c
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该研究以BaP—HSF1—HSP70为主线,采用Western-blot、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-dimensional polyacrylimade gel electrophoresis,2D-PAGE)、单细胞琼脂糖凝胶电泳(single cell agarose gel electrophoresis,SCGE)、凝胶阻滞电泳(electropharetic mobilityshift assay,EMSA)、流式细胞术、膜片钳等方法,观察了BaP作用下内皮细胞HSP70基因表达水平的变化,分析了其变化在BaP所致细胞增殖、凋亡和DNA损伤中的可能作用;并进一步探索了BaP导致HSP70基因调控的关键点—HSF1和信号传导变化的特点及其可能意义,以期阐明HSP70在BaP致机体损伤与防御中的作用,为心血管疾病的防治提供科学依据.该研究结果表明:(1)证明BaP可诱导体外培养的猪主动脉内皮细胞合成CYP1A1,表明采用不加活化剂(S9)的体外染毒模型是可行的;(2)一定剂量的BaP主要抑制内皮细胞HSP72的表达,HSP72表达降低可使细胞耐受BaP毒性作用的能力下降;(3)维生素E、C可明显减弱BaP对HSP70表达的抑制作用,提示了抗氧化维生素在减轻BaP的危害中起到一定作用;(4)细胞HSF1水平与分布、HSF1-HSE结合能力的改变可能是BaP导致HSP70表达降低原因之一,而研究HSF1与HSE结合之后的分子机制对进一步揭示BaP致HSP70的基因表达降低和BaP危害的作用机制还有着重要意义;(5)一定剂量BaP可能主要通过抑制PKC活性使HSF1的磷酸化受阻而最终导致HSP70合成抑制.
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