论文部分内容阅读
目的：观察笃斯越桔浆果提取物对小鼠H22移植型肝癌增殖的抑制作用,并检测荷瘤小鼠血清IL-2,TNF-α及细胞凋亡相关蛋白Cyclin E和p27kip1的表达以研究其作用机制。方法：建立小鼠H22肝癌腹水移植瘤模型。将60只体重18-22g雄性昆明小鼠随机分成空白对照组、5-氟尿嘧啶对照组、模型组、笃斯越桔高、中、低剂量组,每组10只,除空白组外其他各组均为H22荷瘤小鼠。连续给药10天,观察笃斯越桔提取物对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用和小鼠体重变化。最后一次给药后,禁食不禁水24h后,称重并眼球取血。脱颈处死小鼠,获得瘤体、脾、胸腺并称重,计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。ELISA检测血清中IL-2和TNF-α含量,DNA Ladder琼脂糖电泳检测细胞凋亡,western blot检测肿瘤细胞中Cyclin E、p27kip1蛋白表达。结果：1.建立了小鼠H22肝癌腹水移植瘤模型。2.笃斯越桔高、中、低剂量组,5-氟组、模型组瘤重分别为0.4134±0.14g、0.6106±0.18g、0.6832±0.42g、0.3565±0.11g、1.3736±0.59g,笃斯越桔高、中剂量组、5-氟组平均瘤重显著低于模型组(P<0.05),5-氟组、笃斯越桔高、中剂量组对H22移植瘤抑制率分别为74.1%、69.9%、55.6%。笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组用药前后体重变化分别为8.2±1.9g、7.7±3.1g、8.4±2.2g、7.9±2.6g、8.6±2.7g,各组之间无显著性差异(P>0.05)。笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组各组胸腺指数分别为1.42±0.07、0.875±0.16、0.922±0.08、0.787±0.11、0.874±0.09,笃斯越桔高剂量组显著高于模型组(P<0.05),5-氟组与模型组无显著性差异(P>0.05)；脾指数分别为15.68±0.57、9.94±0.81、9.64±0.75、8.91±0.87、9.71±0.38,笃斯越桔高剂量组显著高于模型组(P<0.05),5-氟组与模型组无显著性差异(P>0.05)。3.将H22肿瘤组织提取DNA,用1%琼脂糖凝胶电泳发现笃斯越桔高剂量组出现明显DNA Ladder现象,5-氟组和肿瘤组没有出现DNA Ladder现象。4.将H22肿瘤组织提取细胞总蛋白,进行western blot分析。5-氟组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、模型组细胞中,Cyclin E与β-actin相比相对含量分别为0.3567±0.0092、0.6110±0.0284、0.5668±0.0285、0.3184±0.0047、0.5830±0.0451,5-氟组和笃斯越桔高剂量Cyclin E表达量与模型组相比有显著性降低(P<0.05); p27kip1与β-actin相比的相对含量分别为0.4781±0.0081、0.7113±0.0160、0.4344±0.0123、0.2297±0.0188、0.2343±0.0029,笃斯越桔高中p27kip1表达量与模型组相比显著性升高(P<0.05),笃斯越桔中、低剂量组、5-氟组与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。5.ELISA检测得到空白组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、5-氟组、模型组小鼠血清IL-2水平分别为7.18±0.38ng/ml、3.63±2.07ng/ml、5.73±1.48ng/ml、6.03±1.56ng/ml、5.68±1.7ng/ml2、5.73±2.07ng/ml,模型组和5-氟组血清IL-2含量显著低于空白组(P<0.05),笃斯越桔高、中、低剂量组血清IL-2含量,分别与5-氟组、模型组、空白组比较均没有显著性差异(P>0.05)。6.ELISA法检测空白组,5-氟组、笃斯越桔浆果提取物高、中、低剂量组、模型组小鼠血清TNF-a含量分别为1.33±0.87ng/ml、2.03±1.41ng/ml、1.83±1.08ng/m1、2.43±1.08ng/m1、2.63±1.24ng/ml、2.53±0.66ng/ml,各组与空白组相比,血清TNF-α含量无显著性差异(P>0.05)。笃斯越桔高、中、低剂量组、5-氟组血清TNF-a含量与模型组无显著性差异(P>0.05),笃斯越桔高、中、低剂量组与5-氟组血清TNF-a无显著性差异(P>0.05)。结论：笃斯越桔浆果提取物对小鼠H22肝癌有抑制作用,并能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数；能够诱导H22肝癌肿瘤细胞发生细胞凋亡,可能通过诱导下调cyclin E水平,上调p27kip1水平发挥作用；笃斯越桔浆果提取物没有显著改变荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平。