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背景及目的:肝硬化属于影响全球公共健康的重要问题之一,其病因繁多,其中,全球每年约100万人死于HBV感染所致的肝硬化,肝衰竭和原发性肝癌[1],目前临床注重对肝硬化的病因及对症治疗,然而肝硬化是不可逆病变,因此,对肝硬化早期病变肝纤维化阶段的干预尤为重要。已知肝脏对外界各种刺激的免疫应答是病情进展和临床转归的关键因素,那么在原始治疗方案基础上联合新的免疫治疗策略,可能是肝纤维化逆转的有效方法。研究表明,新型免疫因子IL-17可能参与多脏器纤维化的发生,并且相关实验证实,雷帕霉素可通过调控Th17/Treg细胞平衡改善CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化。本科研团队前期实验发现,活性维生素D3作为重要免疫调节剂,通过抑制HSC增殖并且促其凋亡发挥抗纤维化作用,但其机制尚未明确,未能广泛应用于临床。本研究从1,25-二羟基维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3)的免疫调节角度出发,探索其抑制肝纤维化发生发展的作用机制。本实验通过观察1,25(OH)2D3分别对大鼠肝纤维化进程中体内IL-17及其相关因子RORγt、MIP3α蛋白和基因表达水平的影响,分析1,25(OH)2D3抑制大鼠肝纤维化发生发展的可能作用机制。方法:经典CCL4腹腔注射法建立大鼠(Sprague-Dawley)肝纤维化模型,治疗组于建模同时给予1,25(OH)2D3(3ng×100g-1,1次×d-1)花生油溶液灌胃8周,通过运用液相色谱-串联质谱法检测血清中25(OH)D3浓度,放免法测定血清肝纤维化四项,免疫酶联吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)动态分析血清白介素17(Interleukin 17,IL-17)浓度,观察正常组与模型组、药物溶剂组与治疗组间血清肝纤维化四项及IL-17表达差异。采用HE及Masson染色法对各组大鼠肝脏组织染色并行病理学分期,免疫组织化学法检测各肝组织IL-17和MIP3α蛋白表达情况,免疫印迹(Western-Blot)法及实时定量免疫荧光反应(RT-PCR)法分别测定各肝组织IL-17、RORγt、MIP3α蛋白及mRNA表达水平,观察正常组与模型组、药物溶剂组与治疗组间肝脏纤维化程度,肝组织IL-17、RORγt、MIP3α蛋白及mRNA的表达变化。结果:1.病理学检查提示模型复制成功,治疗组大鼠血清25(OH)D3浓度较药物溶剂组明显升高(P=0.000<0.05);模型组及药物溶剂组血清25(OH)D3水平较正常组均显著降低(P<0.05),差异具有统计学意义。2.8周时,模型组和药物溶剂组血清HA、LN、PⅢNP、CIV、IL-17表达较正常组均明显升高,且药物溶剂组显著高于治疗组(P值均<0.05),差异具有统计学意义,且在建模过程中,血清IL-17水平随时间推移呈先升高后降低趋势。3.对各组大鼠肝组织行HE及Masson染色,发现与正常组(S0)相比,模型组(S4)及药物溶剂组(S4)大鼠肝纤维化明显,而治疗组(S2)肝纤维化程度较模型组及药物溶剂组明显减轻。4.模型组及药物溶剂组肝脏中IL-17、RORγt、MIP3α蛋白表达量显著高于治疗组(P值均<0.05),差异具有统计学意义,且在造模过程中,肝组织IL-17蛋白表达随时间推移呈逐渐增强趋势,呈明显时间依赖性。5.对各组大鼠肝组织行Rt-PCR法检测,发现正常组大鼠肝脏IL-17、RORγt、MIP3αmRNA表达甚微,而模型组及药物溶剂组肝脏IL-17、RORγt、MIP3αmRNA表达量显著高于治疗组(P值均<0.05),差异具有统计学意义。6.对不同时间点(4w,6w,8w)的大鼠血清及肝脏组织中IL-17表达量行相关性分析,发现模型组、药物溶剂组及治疗组中血清与肝组织IL-17表达量随时间推移均呈显著负相关(r1=-0.979,r2=-0.611,r3=-0.878)。结论:1.肝纤维化大鼠血清及肝脏IL-17表达较正常大鼠明显升高,提示IL-17参与肝纤维化发生发展;2.1,25(OH)2D3对大鼠肝纤维化的形成具有显著抑制作用,进一步证实1,25-二羟维生素D3抑制肝脏纤维化发生发展;3.1,25(OH)2D3明显降低大鼠肝脏中IL-17及其相关因子RORγt、MIP3α蛋白及mRNA表达,发挥抗纤维化作用,提示1,25(OH)2D3可能通过调节IL-17介导的免疫微环境调控大鼠HSC的激活与增殖。