第一部分 蓝光对大鼠视网膜的损伤 目的 观察蓝光对大鼠视网膜的损伤。 方法 21只SD大鼠随机分为3组,每组7只,除对照组外,分别接受蓝光照射20min、60min,光照后观察光镜、透射电镜形态学改变,TUNEL法染色观察细胞凋亡。 结果 蓝光照射20min时即可观察到视网膜色素上皮(RPE)细胞出现形态学改变,而光感受器细胞损伤的发生晚于RPE细胞。蓝光照射20min后TUNEL法染色观察到RPE细胞出现阳性染色细胞核,而蓝光照射60min后RPE细胞出现较多阳性染色细胞核,外核层出现少量阳性染色细胞核。 第二部分 体外培养成人视网膜色素上皮细胞生长特性的观察 目的 体外培养成人RPE细胞,观察其形态学特征和生长特性,进行细胞鉴定,为研究蓝光对RPE细胞的损伤作用提供基础。 方法 取意外死亡的健康成年男性(24—35岁)眼球6只,采用胰蛋白酶消化法获得RPE细胞并体外培养。于相差显微镜下观察细胞生长过程及形态变化,计算生长数据,绘制生长曲线,用免疫组织化学方法进行RPE细胞鉴定,并在透射电镜下观察其形态特征。 结果 成人RPE细胞体外生长旺盛。细胞接种后1天贴壁,原代刚刚贴壁的RPE细胞呈圆形,富含黑色素颗粒。3～4天后,细胞变扁平,梭形。随着体外分裂次数的增多,细胞内的色素颗粒逐渐减少。于接种后7天左右细胞达铺满状态。免疫细胞化学染色阳性,胞浆内见棕黄色着染。透射电镜观察RPE细胞内富含线粒体及黑色素颗粒,纵切面可见微绒毛、基底膜内褶及细胞间连接复合体等结构特征。 第三部分