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【目的】1.应用恒古骨伤愈合剂治疗兔创伤性深静脉血栓(TDVT),通过观察血栓形成情况评估其疗效;2.应用ELISA技术检测D-二聚体(D-Dimer)、抗磷脂抗体(APA)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)在恒古骨伤愈合剂治疗兔TDVT三个关键时相点的表达量;3.通过观察上述三个指标在不同组别的表达变化,探究恒古骨伤愈合剂治疗兔TDVT过程中对凝血系统的影响。【方法】一、恒古骨伤愈合剂治疗兔TDVT的疗效观察及血液、血管组织采集1.实验动物及分组:本实验共64只SPF级新西兰大白兔,按给药不同随机分为正常对照组(A组共8只)、恒古骨伤愈合剂组(B组共28只)、生理盐水对照组(C组共28只);再根据观察时间不同分别将B、C组分为造模后24小时观察组(B1、C1组,每组各8只),造模后72小时观察组(B2、C2组,每组各8只)及造模后120小时观察组(B3、C3组,每组各8只);2.造模方法:实验采用左侧股静脉钳夹+髋人字石膏固定方法对B、C组兔进行造模。实验兔麻醉后,取腹股沟内侧沿股动脉走行方向作一长4-5cm纵行切口,暴露约2.5cm的左侧股静脉,用12.5mm全齿蚊式血管钳分五段各钳夹1次,力量为血管钳紧2扣,每次持续3秒;用1号丝线全层间断缝合皮肤切口,不放置引流,均行石膏固定;3.给药时间及剂量:B组兔造模后立刻灌喂恒古骨伤愈合剂,以后每隔24h喂药一次(剂量为1.17ml/kg);C组兔在对应时间灌喂生理盐水(剂量为1.17ml/kg);4.观察、取材时间及方法:造模前对A组各兔抽取耳缘静脉血1.5ml,装入标准枸橼酸钠抗凝管,混匀、离心、取血浆-20℃保存;造模后24小时,B组随机取8只作为B1组,C组随机取8只作为C1组,剪开切口缝线,肉眼观察并比较两组血栓发生率,并取长约1.0cm的股静脉进行HE染色、光镜观察确定血栓形成状态,同时,由耳缘静脉抽取每只兔各1.5ml静脉血,装入标准枸橼酸钠抗凝管,混匀,3000rpm/min离心20min后取血浆-20℃保存;造模后72小时和120小时分别随机取8只作为B2、C2、B3、C3组,以相同方式取材、采血;5.血栓发生率统计学处理:对各组资料数据进行x2检验,以P<0.05为有统计学意义,P<0.01为有显著的统计学意义。二、ELISA检测D-Dimer、APA、TAT探讨恒古骨伤愈合剂治疗TDVT对凝血系统的影响1.ELISA检测:采用ELISA方法分别检测A、B1、B2、B3、C1、C2、C3各组大白兔血液中D-Dimer、APA、TAT的表达量;2.统计学处理:使用SPSS11.5统计软件包对所得表达量进行统计学处理。各组计量资料数据用均数士标准差((?)±s)表示,两组数据间比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)和S-N-K检验,以P<0.05为差别有统计学意义,P<0.01为差别有显著的统计学意义。【结果】一、恒古骨伤愈合剂治疗兔TDVT的疗效观察及血液样本采集1.实验动物一般情况:B、C两组兔共死亡5只,动物死亡率8.93%2.血栓发生情况:该模型中,股静脉血栓形成高峰期在造模后24h,血栓发生率分别为:B组66.7%(16/24),C组79.2%(22/24),差别有统计学意义(P<0.05);之后血栓开始消退,在恒古骨伤愈合剂治疗72h,血栓可基本消退,此时血栓发生率为:B组25.0%(4/16),C组75.0%(12/16),差别有统计学意义(P<0.05);造模后120h,B3组血栓已完全消退,C3组血栓发生率为50%(4/8),两者比较差别有显著的统计学意义(p<0.01)。3.各组所获取的股静脉组织,肉眼、光镜观察结果与相应血栓状态一致。二、ELISA检测D-Dimer、APA、TAT探讨恒古骨伤愈合剂治疗TDVT对凝血系统的影响1.C组(9.11±1.11ng/ml)与A组(1.70±0.30ng/ml)相比,D-dimer、APA、TAT的表达量存在统计学差异2.C组(9.11±1.11ng/ml)与B组(2.27±0.62 ng/ml)相比,D-dimer、APA、TAT的表达量存在统计学差异【结论】1.恒古骨伤愈合剂能有效降低兔TDVT发生率,促进血栓消退;2.恒古骨伤愈合剂可能通过影响凝血系统,降低血液高凝状态治疗兔TDVT。