酒石酸长春瑞滨热敏脂质体研究

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ceng0606
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目的:酒石酸长春瑞滨(VRT)可以通过作用于肿瘤细胞微管蛋白而干扰肿瘤细胞代谢,诱导有丝分裂微管崩解,使细胞停止于有丝分裂中期。临床主要用于治疗非小细胞肺癌、急性淋巴细胞白血病、转移性乳腺癌,也用于何杰金及非何杰金淋巴瘤,软组织肉瘤等。目前,VRT有注射剂和软胶囊两种剂型应用于临床,直接静脉给药对静脉的刺激性大,易引起注射部位剧烈疼痛、静脉炎等导致其耐受性差,同时伴有严重的骨髓抑制及血液、消化系统毒性,从而限制了酒石酸长春瑞滨的临床应用。大量文献研究表明,采用脂质体装载化疗药物可以提高化学药物的肿瘤靶向性,从而达到减毒增效的目的。本文针对酒石酸长春瑞滨的制剂缺陷,将长循环脂质体与温度敏感特异性靶向设计理念相结合,制备长循环热敏脂质体,旨在提高VRT临床应用的顺应性,改其体内的药动学特征;结合热疗法,当肿瘤局部加热达到热敏脂质体相变温度附近时,其包裹的药物大量释放并积聚于肿瘤局部,达到靶向化疗的作用,以期增强药物疗效,降低毒性。方法:在文献研究的基础上,结合实验室现有条件,设计了其制备工艺路线。选择DPPC、DSPG、MSPC等磷脂材料,采用薄膜分散探头超声的方法制备空白脂质体,并以粒径、稳定性为主要考察指标,对制备工艺条件进行了全面的优选。选择pH梯度法作为将VRT载入空白脂质体,并以包封率为主要考察指标,对该工艺路线中影响载药主要因素进行了单因素考察和正交试验,最终确定了V-TSL的处方及其制备工艺。建立反相离子对HPLC法测定V-TSL中VRT及其有关物质的含量。在含量测定方法建立的基础上,采用微型凝胶柱离心法分离V-TSL中脂质体与游离药,通过对分离条件的考察、优化,建立了V-TSL的包封率测定方法。对V-TSL的外观形态、粒径及其分布、pH、相变温度等理化性质进行了考察。以粒径、包封率、含量及pH为评价指标,对V-TSL的稳定性进行了初步评价。在V-TSL处方工艺确定的基础上,采用DSPE-PEG作为空间保护剂,制备了V-LTSL(酒石酸长春瑞滨长循环热敏脂质体),以VRT普通注射液(V-I)、普通脂质体(V-L)为对照,对V-LTSL的大鼠体内药动学、荷瘤小鼠热敏抑瘤药效进行了研究。结果:空白脂质体的磷脂处方为DPPC/DSPG/MSPC(w/w,7.5:1:0.8),制定了5mL空白脂质体制备工艺的标准操作规程(SOP),3批空白脂质体平均粒径(D50)分别为95.5±1.1nm、92.9±1.5nm、94.4±1.3nm,冰箱4℃放置30d粒径增长10-20nm,工艺重复性好,符合载药要求;载药处方为50 mg·mL-1含pH梯度空白脂质体(浓度以磷脂投料量计算)4.0mL与8.0mg·mL-1VRT溶液1.0mL,药脂比为125,水化介质为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲盐(200mM,pH3.5-4.0)洗脱溶剂为PBS(200mM,pH6.5-6.8),孵化条件为35℃孵化35min,制定了5mLV-TSL制备工艺的SOP,3批V-TSL的平均包封率(EE%)分别为91.2±1.3、90.0±1.7、91.9±1.1%,平均粒径分别为115±2.1、118±1.7、121±1.9nm。V-TSL中含量、有关物质、包封率测定方法的方法学验证结果均符合定量分析的要求;V-TSL为半透明带蓝色乳光的混悬液,流动性好,粒子圆整、大小较均匀,平均粒径(D50)为116±3.5nm,pH为6.55,接近中性,相变温度41.8℃,体外热敏释放特征明显;在室温、避光条件下放置3d,粒径与包封率变化不明显;5%葡萄糖或9%氯化钠溶液稀释10倍后放置2h,稀释前后粒径与包封率变化不明显;在4℃避光的条件下无菌分装储存2个月粒径从103.2nm增至212.5nm,包封率从92.9%下降至48.5%,pH从6.72下降至5.97,含量无明显变化,而以2%乳糖为冷冻保护剂,在-20℃避光条件下储存2个月内粒径从108.2nm增大到141.5nm,包封率从93.6%下降至82.7%。V-L的药时曲线符合二室模型,V-I、V-LTSL的药时曲线则符合三室模型,V-LTSL组的T1/2beta、AUC分别是V-I组及V-L组的10.5、8.8倍及15.9、3.8倍,而后两组的CL分别是V-LTSL组的8.9、3.8倍。结合热疗,V-LTSL给药组荷瘤小鼠肿瘤的生长曲线平缓,抑瘤率最高,肿瘤切片显示V-LTSL对肿瘤细胞杀灭效果最好。结论:酒石酸长春瑞滨热敏脂质体处方及工艺稳定,重复性好,为半透明带蓝色乳光的混悬液,粒子圆整,粒径(D50)为110-125nm,载药量大于1.8mg·mL-1,包封率超过90%,有关物质小于0.6%,pH接近中性,相变温度为41.8℃,体外热敏释放特征明显。短期放置、稀释调节稳定,可满足临床应用要求,以2%乳糖为冷冻保护剂,在-20℃避光条件下储存2个月内稳定。V-LTSL在大鼠体内稳定性显著提高,具有长循环性质,对荷瘤小鼠具有热敏增效减毒效应,提示V-LTSL具有热敏靶向性。
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