论文部分内容阅读
背景随着医疗水平的进步,分子靶向治疗逐渐成为治疗肿瘤的新兴手段,尤其适用于中晚期癌症患者。组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂作为一类新型靶向抗肿瘤药物,通过抑制HDAC活性,促进抑癌基因转录,发挥强大抗肿瘤功效。但是,近几年文献报道,HDAC抑制剂具有增强肺癌、前列腺癌、乳腺癌等肿瘤细胞迁移与侵袭能力的作用。已有研究发现HDAC抑制剂具有抑制食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖的作用,但HDAC抑制剂对ESCC细胞迁移的影响尚不明确。目的阐明HDAC抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对ESCC细胞迁移的影响及其可能的机制,为临床抗癌药物的合理应用提供理论依据。方法本实验选用KYSE-150、EC9706两种ESCC细胞系。首先,通过Transwell实验检测TSA对ESCC细胞迁移能力的影响;然后,利用Western blot技术检测TSA对上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标记物及组蛋白H3K9乙酰化(H3K9Ac)水平表达的影响;其次,通过转染小干扰RNA Slug(Small interfering RNA Slug,si-Slug),利用Transwell实验技术检测小干扰RNA敲低Slug后对TSA所诱导的ESCC细胞迁移能力的影响,利用Western blot技术检测EMT相关标记物的表达情况;最后,通过给予细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)抑制剂(U0126、PD98059)、纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)抑制剂(PAI-039)以及溴结构域蛋白4(Bromodomain containing protein 4,BRD4)抑制剂(JQ1),检测不同抑制剂对TSA诱导的ESCC细胞迁移能力的影响。结果TSA明显增强ESCC细胞的迁移能力;Western blot实验结果表明,TSA除了增加组蛋白H3K9的乙酰化水平外,还使E-cadherin蛋白表达水平下调,β-catenin、Vimentin和Slug蛋白表达水平上调,同时ERK1/2的磷酸化(p-ERK1/2)水平也明显上调。通过转染si-Slug,将Slug敲低,TSA增强ESCC细胞迁移的能力被明显抑制,EMT现象也明显被逆转。其次,U0126也明显降低了TSA诱导ESCC细胞迁移能力的增加,并且下调ERK下游信号分子PAI-1的表达水平。PAI-1抑制剂PAI-039抑制TSA诱导的ESCC细胞迁移能力的增加,抑制EMT发生,但是对Slug蛋白表达水平并无影响。组蛋白乙酰化可招募BRD4,BRD4抑制剂JQ1逆转TSA诱导的ESCC细胞中p-ERK1/2、PAI-1蛋白表达水平的增加以及TSA引起ESCC细胞迁移能力的增强与EMT的发生。结论(1)TSA通过促进Slug转录,引起EMT发生,进而增强ESCC细胞的迁移能力;(2)TSA通过激活BRD4/ERK/Slug以及BRD4/ERK/PAI-1通路,促进ESCC细胞的迁移。