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目的： 1.研究重层化培养脐带间充质干细胞在培养过程中细胞因子的分泌情况及其形成的胶体的材料特性；2.将重层化人脐带间充质干细胞形成的胶体，通过小鼠体内移植实验，探究其作为一种软组织填充材料的可行性。 方法： 1.从我院健康孕妇的剖宫产术中获取脐带，并通过组织块贴壁法培养出原代HUCMSCs。继续传代、扩增培养得到第三代HUCMSCs，待之达到100％融合时，加入抗坏血酸1ul/ml培养基，加入的抗坏血酸的浓度为50ug/ml，每2天换液，连续培养至14天，细胞培养50%、100%融合，重层化培养的第1、3、7、14天留取上清样本，至14天肉眼观察细胞形成膜状，即得到重层化的HUCMSCs胶体，用ELISA测定收集的上清，重层化培养过程的生长因子变化情况，用组织化学法了解其胶体的材料构成。 2.取7周龄的昆明小鼠24只，分成3组，将实验的填充材料注射到小鼠背部肌膜下，制作动物软组织填充实验模型，每只动物左右两侧各取两个注射点，左侧两个作为实验组，右侧相同位置作为实验组。实验组为AJ组（ASC成胶组）：含有0.5ml的重层化HUCMSCs胶体与0.5ml的DMED；对照组1为PJ组（ppp成胶组）：含有0.5ml的PPP+细胞胶体与0.5ml的DMEM；对照组2为H组（HUMCSs）：含有2.5×106的HUMSCs与1ml的DMEM。分别在注射后的第15、28天对注射区皮肤进行大体观察，并计算填充物占初始大小的百分比，注射区皮肤组织切片HE染色观察，.通过免疫荧光染色法观察 I型胶原和血管的生成情况。 结果： 重层化培养的HUCMSCs在培养过程中可分泌高水平的IGF-I、HGF、TGF-β1、VEGF等各种细胞因子，自我合成Ⅰ、Ⅲ型胶原及透明质酸等形成细胞外基质，并转变为α-SMA阳性表达，培养至14天可形成稳定的胶体膜片。动物实验表明，14天后AJ组剩余的填充物体积占原始大小的36.14±2.67%，PJ组为8.426±0.66%，H组为0.73±0.13%，28后AJ组为25.91±0.13%，PJ组为0.63±0.11%，H组为0.06±0.01%；其两两对比均具统计学意义，AJ组填充的软组织存活率最高。α-SMA免疫荧光染色显示AJ组填充组织内有新生血管，抗I型胶原免疫荧光染色显示其存在I型胶原合成。 结论： 以重层化状态的细胞形成的胶体材料能自分泌丰富的细胞外基质和各种生长因子，体内移植能够诱导I型胶原合成和微血管生成，生物相容性佳，有成为一种新型软组织填充潜力。