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目的及内容:甘油磷脂(Glycerophospholipids,GPs)和鞘脂(Sphingolipids,SPs)类脂质分子具有多种结构并且广泛存在于机体中,参与调控多种生物学功能,在心血管疾病的发生和发展过程中发挥重要的作用,但目前对于心梗过程中甘油磷脂和鞘脂类脂质谱的变化仍缺少系统性研究。Omega-3多不饱和脂肪酸(n-3 Polyunsaturated Fatty Acids,n-3 PUFA)是重要的营养物质,补充n-3 PUFA可用于预防心血管疾病的发生,但n-3 PUFA的摄入如何影响甘油磷脂和鞘脂类脂质谱尚不清楚。所以我们基于高效液相色谱串联质谱(High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,HPLC-MS/MS)技术,针对甘油磷脂和鞘脂类脂质分子建立了检测方法,将建立的靶向脂质组学方法应用于研究心肌梗死和健康人群摄入n-3 PUFA后脂质代谢的变化。方法:我们选择了含有17个碳原子的甘油磷脂和鞘脂类脂质同系物作为内标化合物,使用质谱通过多反应监测扫描模式整理出甘油磷脂和鞘脂类脂质分子的质谱参数信息。根据不同脂质分子的电离特性,建立4个不同模式的靶向脂质组学方法。使用UPLC BEH C18色谱柱优化色谱分离条件。对小鼠进行心脏左前降支冠状动脉结扎手术诱导小鼠发生心肌梗死,利用建立的靶向脂质组学研究小鼠心梗发生后血浆和心脏组织中脂质分子含量的变化;并在健康人群摄入n-3 PUFA 0、3、7、14和21天后,对血浆中甘油磷脂和鞘脂类脂质分子进行检测。结果:我们基于高效液相色谱串联质谱建立靶向脂质组学,检测样本中的甘油磷脂和鞘脂类脂质分子。根据脂质分子的电离特性共开发了四种检测方法,分别是“甘油磷脂正离子模式方法”、“甘油磷脂负离子模式方法”、“鞘脂正离子模式方法”、“鞘脂负离子模式方法”。并基于甲基叔丁基醚对样本的预处理方法进行了优化。通过靶向脂质组学的检测,我们发现小鼠发生心肌梗死后,心脏组织中甘油磷脂类脂质分子,如溶血磷脂酸LPA(18:2)等含量下降,磷脂酰胆碱PC(30:0)等含量增多;鞘脂类脂质分子,如神经酰胺-1-磷酸Cer1P(14:0)、(16:0)、(16:1)等含量增多。但在血浆中没有发现含量显著变化的脂质分子。健康人群摄入n-3 PUFA后,甘油磷脂和鞘脂类脂质分子呈现规律性的变化。大部分溶血磷脂类脂质和一些低丰度脂质的含量变化呈现升高的趋势,如LPE(22:6),PS(36:2)、(36:3)等。多数磷脂酰胆碱、烷基磷脂酰胆碱以及部分溶血磷脂酰甘油脂质的含量在摄入n-3 PUFA后第21天降低。溶血磷脂酸,溶血磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸的含量与肌酸激酶同工酶水平呈负相关。通过对数据进行对比,我们发现溶血磷脂酰甘油LPG(22:5)、(22:6),磷脂酰乙醇胺PE(32:1)和磷脂酰丝氨酸PS(34:1)在心梗后含量升高,溶血磷脂酰乙醇胺LPE(22:6),磷脂酰丝氨酸PS(36:1)、(36:2)、(36:3)、(38:2)、(38:3)、(38:4)、(38:6)、(40:5)在心梗后含量降低,但是摄入n-3 PUFA后以上4种脂质呈现相反的变化趋势。结论:我们建立了一个涵盖400余种甘油磷脂和鞘脂类脂质分子的靶向脂质组学,可以将该靶向脂质组学运用于对人类以及动物的血浆、组织中进行脂质分子的检测,并可以对所测的脂质分子进行相对定量。我们将该方法应用于小鼠发生急性心肌梗死和健康人群摄入n-3 PUFA中的两种模型中进行靶向脂质组学的检测。心肌梗死发生后心脏组织中部分脂质分子的含量发生显著变化。其中溶血磷脂类、神经酰胺-1-磷酸等脂质分子可能与心梗相关的病理生理学过程有关。健康人群摄入n-3 PUFA后甘油磷脂类脂质分子呈现规律性的变化,为临床应用n-3 PUFA提供了药理基础。溶血磷脂酰乙醇胺LPE(22:6)、溶血磷脂酰甘油LPG(22:5)、(22:6)、磷脂酰乙醇胺PE(32:1)、磷脂酰丝氨酸PS(34:1)、(36:1)、(36:2)、(36:3)、(38:2)、(38:3)、(38:4)、(38:6)、(40:5)在心梗发生后的变化趋势与健康人群摄入n-3 PUFA后的变化趋势相反,提示以上4种脂质的变化可能与n-3 PUFA的保护作用有关。