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猫传染性腹膜炎(FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)引起的,对家猫和野生猫科动物可致死的重要传染病之一,约有5%的家猫死于FIP。FIPV可以在单核细胞和巨噬细胞中有效且持续性复制,致使感染的单核巨噬细胞激活,并造成全身性的感染。天然免疫系统利用模式识别受体(PRRs)对入侵病原体的病原相关分子模式(PAMPs)进行识别,启动宿主抗病原微生物的反应,诱导Ⅰ型干扰素和促炎性因子激活,进而抵抗病原微生物的感染。冠状病毒可以进化出多种策略逃避宿主天然免疫应答。然而,FIPV是否可获得拮抗Ⅰ型干扰素应答的能力以及免疫逃逸分子机制的相关研究报道较少,本研究以FIPV毒株DF2作为研究对象,探究FIPV对Ⅰ型干扰素信号通路激活的抑制作用,揭示FIPV nsp5阻断信号传递抑制IFN-β应答的分子机制,可为FIPV调控宿主Ⅰ型干扰素免疫应答实现免疫逃逸的分子机制研究提供新思路,也为FIPV致病机制的研究和抗病毒药物和疫苗的研发提供科学支撑。为了探究FIPV感染宿主细胞后对Ⅰ型干扰素应答的影响,本研究利用双荧光素酶报告实验和荧光定量PCR对IFN-β启动子活性水平和IFN-β以及下游ISGs mRNA进行了检测。结果显示,FIPV DF2株感染CRFK细胞后不能诱导IFN-β应答和ISGs(Viperin,ISG15,IFITMI)的表达,反而能够抑制SeV和poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素通路的激活。机制研究显示,FIPV DF2株感染CRFK细胞后剂量依赖性的抑制了SeV和poly(I:C)诱导的IRF3启动子活性的激活。此外,利用Western blot和激光共聚焦实验探索了FIPV DF2株感染CRFK细胞后对IRF3的磷酸化水平以及定位情况的影响。结果表明,FIPV DF2株感染显著抑制了SeV诱导的IRF3的磷酸化,并且阻断了SeV诱导的IRF3的核转运。综上所述,FIPV感染可以通过拮抗IRF3通路阻断Ⅰ型干扰素的激活。在已知的病毒免疫逃逸策略中,抑制干扰素信号通路中接头分子是一种普遍的逃逸手段。本研究发现FIPV-nsp5是RLR介导的Ⅰ型干扰素通路的负调控因子。过表达FIPV-nsp5可以显著抑制SeV或poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素反应。进一步筛选发现FIPV-nsp5通过靶向RLR信号通路中TBK1的上游分子进而抑制Ⅰ型干扰素信号转导。分子机制研究表明FIPV-nsp5切割接头分子NEMO,导致后者功能丧失,进而抑制了Ⅰ型干扰素的激活;FIPV-nsp5靶向NEMO Gln-132,Gln-205,Gln-231三个位点,而且FIPV nsp5对NEMO的切割依赖其3C蛋白酶活性且不需要细胞中凋亡相关降解途径的参与。此外,免疫共沉淀和磷酸化实验结果表明,FIPV-nsp5对NEMO的切割阻断了NEMO对TANK的招募,抑制了IRF3的磷酸化,从而拮抗了RLR介导的Ⅰ型干扰素信号通路的激活。本研究揭示了FIPV-nsp5如何抑制宿主干扰素免疫应答从而导致FIPV实现免疫逃逸的分子机制,为猫传染性腹膜炎的科学防控提供了理论依据。