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研究背景:冠心病是导致死亡的首要原因,冠心病的早期表现为冠状动脉粥样硬化,而内皮功能障碍是冠状动脉粥样硬化的早期标志,目前尚无有效治疗内皮功能障碍的方法。高脂血症会引起ox-LDL在内皮细胞沉积导致内皮细胞激活进而引起内皮功能障碍,并且CD4+T细胞在内皮细胞的激活中发挥着重要作用。IL-35是IL-12家族中的免疫抑制因子,已有研究证实IL-35可以抑制溶血磷脂酰胆碱和脂多糖诱导的内皮细胞激活,并且IL-35可以调控CD4+T细胞的分化。但IL-35是否可以通过CD4+T细胞抑制高脂诱导的内皮细胞激活尚不可知。研究目的:探讨白介素-35（interleukin-35,IL-35）在高脂诱导的内皮细胞激活中的作用及机制。方法:1.取健康成人血,密度梯度离心分离PBMC,磁珠分选CD4+T细胞,分为4组,分别为空白对照（control）组、IL-35（50ng/ml）组、IL-35（100ng/ml）组、IL-35（200ng/ml）组。按照分组用三种不同浓度的人重组IL-35处理,置于孵箱中培养5天;2.取人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,分别为空白对照（control）组、ox-LDL组、ox-LDL+10ng/ml IL-35组、ox-LDL+100ng/ml IL-35组、CD4+T细胞共培养组、ox-LDL+CD4+T细胞共培养组、ox-LDL+IL-35（100ng/ml）CD4+T细胞共培养组。置于孵箱中培养24小时;3.Western Blot检测ox-LDL组、CD4+T细胞共培养组HUVECs中IL-35两个亚基EBI3、IL-12A的蛋白表达水平,检测各组HUVECs中粘附分子（ICAM-1、VCAM-1）的表达水平、炎症因子（IL-6、IL-8）的表达水平;4.Western Blot检测各组CD4+T细胞中IL-35两个亚基EBI3、IL-12A的蛋白表达水平;5.q RT-PCR检测各组CD4+T细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17A、IL-10、TGF-β、IL-6、IL-1β的m RNA水平;6.ELISA检测各组CD4+T细胞上清中IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10的蛋白水平。结果:1.流式细胞仪检测CD4+T细胞纯度达99.48%2.HUVECs:2.1与control组相比,ox-LDL组和CD4+T细胞共培养组EBI3、IL-12A、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-8的蛋白表达量上升;2.2与ox-LDL组相比,ox-LDL+10ng/ml IL-35组、ox-LDL+100ng/ml IL-35组ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-8的蛋白表达量下降,且与IL-35浓度呈正相关;2.3与ox-LDL组相比,ox-LDL+CD4+T细胞共培养组ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-8的蛋白表达量上升。与ox-LDL+CD4+T细胞共培养组相比,ox-LDL+IL-35（100ng/ml）CD4+T细胞共培养组上述蛋白表达量下降。3.CD4+T细胞3.1与control组相比,IL-35组中EBI3、IL-12A的蛋白表达量上升,且与IL-35浓度呈正相关;3.2与control组相比,IL-35组的IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17A、IL-6、IL-1β的m RNA表达量下降,IL-10、TGF-β表达量上升,且与IL-35浓度呈正相关;3.3与control组相比,IL-35组细胞上清中IFN-γ、IL-4、IL-17蛋白量下降,IL-10表达量上升,且与IL-35浓度呈正相关。结论:1.ox-LDL和CD4+T细胞可引起内皮细胞激活;2.IL-35可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞激活;3.IL-35通过CD4+T细胞改善ox-LDL诱导的内皮细胞激活;4.IL-35促进CD4+T细胞表达EBI3、IL-12A;5.IL-35抑制CD4+T细胞IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17A、IL-6、IL-1β的m RNA表达,促进IL-10、TGF-β的m RNA表达;6.IL-35抑制CD4+T细胞IFN-γ、IL-4、IL-17分泌,促进IL-10分泌;7.IL-35抑制Th1、Th2、Th17分化,促进Treg和i Tr35分化。