新型仿生纳米复合支架修复骨缺损的实验研究

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目的评价新型仿生纳米壳聚糖—胶原(nano Chitosan-Sodium Collagen,Nano-CS-COL)支架与Sprague-Dawley(SD)大鼠骨髓基质干细胞(Bonemesenchymal stem cells,BMSCs)的体外相容性。体外构建组织工程骨并植入动物体内,以评价修复节段性胫骨缺损的效果,初步探讨治疗骨缺损的新组织工程学方法。方法本课题应用骨组织工程原理,将骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行体外扩增,然后种植在纳米复合材料上,加入成骨诱导液,观察种子细胞在复合材料上的生长情况以及与材料的生物形容性,体外形成组织工程骨后进而进行SD大鼠胫骨骨缺损的修复。分离培养SD大鼠BMSCs,对细胞表面抗原进行检测;相差显微镜观察细胞形态。聚电解质共凝聚技术(Polyelectrolyte complex coacervation)制作nano-CS\COL支架,取生长良好的P3代细胞,与nano-CS\COL支架体外联合诱导培养,通过细胞粘附率、生长曲线、细胞活力、周期、细胞Ⅰ型胶原染色、扫描电镜观察综合评价材料与细胞的相容性。将Nano-CS-COL/BMSCs复合物种植入大鼠的胫骨缺损内,术后6、12周进行标本的大体观察、X线放射学、组织学,对比实验组与对照组、空白组骨缺损修复情况结果BMSCs可在体外分离扩增,表达CD29、CD44和CD106,不表达CD34和CD45,细胞形态为长梭形,nano-CS\COL平均孔径为150μm,与BMSCs有较好的相容性。术后6、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成有显著性差异(P<0.05)。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异。实验组完全修复骨缺损,对照组部分修复,空白不能自行修复骨损,最后缺损由纤维组织充填。结论1.BMSCs可在体外长期、稳定培养;是理想的组织工程种子细胞;nano-CS\COL与BMSCs有良好的相容性2.BMSCs/nano-CS-COL复合物植入修复鼠胫骨缺损能够加速新骨形成,可以达到修复骨缺损的目的。
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